分子实验中核算NA提取常见问题及分析.docVIP

分子实验中核算DNA提取常见问题及分析一、基因组DNA提取常见问题分析1．样品材料老化或反复冻融导致DNA含量下降：?? 应选择新鲜的材料样品，如新鲜血液、新鲜菌液、刚离体的动物组织或细嫩的植物组织等，不能即时处理的样品应立即放入液氮或-70C低温保存，以免DNA降解。2．样品破壁或裂解不完全，DNA未充分释放： 动、植物材料应在液氮中充分研磨匀浆，G +细菌、酵母等破壁较困难的样品应用溶菌酶、Lyticase酶或机械方式协助破壁。3．样品量过多导致细胞裂解不充分： 加样量过多使裂解液和样品混合不均匀，细胞裂解不充分。不同来源样品的加样量不同。4．DNA吸附不充分： 如在上吸附柱前未加无水乙醇，或用低浓度乙醇代替无水乙醇，则导致DNA不能充分沉淀，与硅胶膜吸附不彻底，因此应在样品裂解后加适量无水乙醇，再上吸附柱使DNA与硅胶膜充分吸附。5．DNA洗脱不适当： 洗脱缓冲液pH值过低会阻碍DNA从硅胶膜上洗脱下来，应确保洗脱液pH值在7.0-8.5之间。 洗脱体积过少，若小于30ul,不易完全浸透硅胶膜，使DNA不能全部洗脱下来，因此洗脱缓冲液应大于30ul。同时如洗脱体积过大，超过200ul,则所得的DNA浓度会降低，但DNA总量不会减少。 洗脱时可将洗脱缓冲液在65-70水浴预热，加入洗脱液后在室温静置2-5分钟，可提高洗脱效率,加大DNA产量。二、提取的基因组DNA有降解，如何解