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〈61〉非无菌产品的微生物检测：微生物计数检测法 生长促进试验和计数方法的适用性 概述 在供试品存在的情况下，必须确立检测微生物的试验能力。 如果引入了可能影响试验结果的在测试性能或产品方面的变更，则必须确认其适用性。 供试菌株的制备 使用供试菌株的标准化稳定悬浮液或者按照以下所述制备。使用菌种保存技术（种子批系统）以便用于接种的可萌发微生物从最初的主种子批不超过五代。按照表1中的描述，分别培养每种细菌和真菌供试菌株。 表1.供试微生物的制备和使用 微生物 供试菌株的制备 生长促进 供试品存在的情况下计数方法的适用性 好养微生物总数 酵母菌和霉菌总数 好养微生物总数 酵母菌和霉菌总数 金黄色酿脓葡萄球菌ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83或NBRC 13276 大豆酪蛋白消化物琼脂培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基 ≤100 cfu ,300-350, ≤3天 大豆酪蛋白消化物培养基/MPN 大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 cfu ，300-350 ,≤3天 绿脓假单胞菌 大豆酪蛋白消化物培养基/MPN 大豆酪蛋白消化物肉汤培养基 ≤100 cfu ，300-350 ,≤3天 枯草芽孢杆菌如：ATCC 6633,NCIMB 8054,CIP 52.62,或 NBRC 3134 大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-350 ,18-24小时 大豆酪蛋白消化物琼脂培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基 ≤100 cfu , 300-350, ≤3天 大豆酪蛋白消化物培养基/MPN 大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 cfu ，300-350 ,≤3天 白色念珠菌 如：ATCC 10231,NCPF 3179, IP 48.72, 或NBRC 1594 沙氏葡萄糖琼脂 大豆酪蛋白消化物培养基 ≤100 cfu ，300-350 ,≤3 天 MPN:不适用 沙氏葡萄糖琼脂 黑曲霉 如：ATCC 16404,IMI 149007,IP 48.72或NBRC 1594 沙氏葡萄糖琼脂 大豆酪蛋白消化物琼脂培养基 ≤100 cfu , 200-250, ≤5天 大豆酪蛋白消化物培养基 ≤100 cfu ，300-350 , ≤5 天 MPN:不适用 沙氏葡萄糖琼脂 用pH 7.0的氯化钠蛋白胨聚山梨醇酯琼脂pH 7.0的氯化钠-蛋白胨液pH7.2的磷酸盐缓冲液或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基中。如有必要，调整pH值为6至8。需要时，用相同的稀释剂作进一步稀释。 不溶于水的非脂肪性产品—将供试品（通常制备1:10的稀释液）悬浮于pH 7.0的氯化钠-蛋白胨液pH7.2的磷酸盐缓冲液或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基中。可以加入表面活性剂，如1g/L的聚山梨酯聚山梨酯聚山梨酯液体或固体悬浮微粒状聚山梨醇酯卵磷脂戊二醛酚类，酒精，醛，山梨酸季铵化合物对羟苯甲酸硫代硫酸盐μm的膜过滤器。过滤器材质的类型按以下标准选择，即细菌保留效能不被待检测样品的成分所影响。对于所列出的每个微生物，单独使用一个膜过滤器。 将按照样品的制备、接种、稀释和抗菌活性的中和/去除项下描述所制备的适当数量的样品（最好相当于1克产品，在cfu数量预计较大时，可减用量）转移至膜过滤器，立即过滤，并用适量的稀释剂冲洗膜过滤器。 为确定总好氧微生物计数（TAMC），将滤膜转移至大豆酪蛋白消化物琼脂培养基的表面。为确定总酵母菌和霉菌联合计数（TYMC），将膜转移至沙氏葡萄糖琼脂琼脂琼脂9～10琼脂琼脂琼脂琼脂琼脂琼脂 2. 结果说明 每个供试品数量的结果 每克或每毫升供试品的细菌可能数 0.1 g or0.1 mL 0.01 g or 0.01 mL 0.001 g or 0.001 mL + + + 超过103 + + – 小于103并且大于102 + – – 小于102并且大于10 – – – 小于10 大肠杆菌 样品的制备和预培养—按非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法61章节下的描述，将不少于1克的供试品以1:10稀释来制备样品，并使用10毫升或对应1克或1毫升的数量，接种于适量（按照检查方法的适用性项下的内容来确定）的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基，混匀，并在温度30o～35 o下培养18～24小时。 选择和再次培养—摇动容器，转移1毫升大豆酪蛋白消化物肉汤培养基至100毫升的麦康基肉汤培养基，并在温度42 o～44 o下培养24～48小时。在温度30o～35o下，于麦康基琼脂培养基的平皿上再次培养18～72小时。 说明—菌落的生长表明可能有大肠杆菌存在，这由鉴定检测确定。如果没有该菌落存在或者鉴定检测呈阴性，则样品符合该检测要求。 建议的溶液和培养基 贮备缓冲溶液—