食品微生物检测----珠子.docVIP

食品微生物检测 I菌落总数测定 一、目的： 掌握食品中菌落总数的测定 二、菌落总数的定义： 食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养 温度和时间、PH、需氧性质等），所得1mL g 检样中所含菌落的总数。（菌落总数主要作为判定食品被污染程度的指标） 三、材料 1、营养琼脂培养基、无菌水 2、 135ml灭菌水1瓶、9ml无菌水3支 3、灭菌锥形瓶装玻璃珠1个，平皿5个 4、采样：自来水15g. 四、实验程序 （一）进入接种室前的准备 1 实验前将需用的实验器材及各种培养基进行高压蒸汽灭菌处理。 2将灭菌完的实验器材及培养基放入接种室，打开紫外灯对接种室消毒30－60min。 3. 进入无菌室前，先用肥皂清洗双手，在消毒水中浸泡双手3min后用水冲洗 （二）称取样品 1手部的消毒 2对天平，量筒、锥形瓶进行消毒。 3用电子天平称取15g自来水装入锥形瓶A中。 （三）实验接种 1.实验前的消毒 实验台面用消毒水擦洗干净。 用酒精棉球擦拭双手消毒。 2检样预实验 ①在无菌操作箱中进行。 ②点燃酒精灯，一切操作在酒精灯周围进行。 ③取自来水15g →135ml灭菌水（带玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液A。用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml注入含9ml灭菌水的试管B内,混合均匀即成10-2稀释液.从B号试管中取1mL的液体加入含有9mL无菌水的C号试管中，震荡,混合均匀即成10-3稀释液. （四）培养 1、选择2个适宜稀释度（10-2，10-3），分别在做10倍递增稀释的同时，即吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿，共4个平皿。 2、稀释液移入平皿后，及时将冷至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml,并转移动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂倾入加有1ml稀释液的灭菌平皿内作空白对照。 3、冷却后平板倒置培养，36±1℃培养48±2h。 （五） 菌落计数 1 做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。记下各平板的菌落数，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 2选取菌落数在30－300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数。 3 菌落数在100以内时，按其实有数报告；大于100时采用两位有效数字： 五、注意事项 1、每做一个稀释度换用1支吸管。 2、每支吸管使用前在酒精灯上消毒，从吸管筒拿出来的 吸管即使没有用过，也不能放回吸管筒里。 3、在做稀释度时，注意吸管尖端不要触及 管内稀释度盖上试管盖时在酒精灯上消毒，然后振摇试管，混合均匀。吸球不能对着吸管吹，沿管壁徐徐注入，以免带入细菌，影响检测结果。 4.将稀释液注入平皿时，平皿盖不宜离平皿底太远。从平皿筒拿出来的平皿即使没有用过，也不能放回平皿筒里 5、眼睛平视吸管凹液面的刻度为稀释液的读数。 6、手握吸管时吸管的尖端部向下。 7、标签要贴好，记得写时间，接种物，浓度，接种人等。 8、用吸管吸取液体时要从低浓度到高浓 度。 六、实验结果 （1） 组别 稀释液 1 2 3 平均数 10^-3 13 24 23 24 10^-2 16 187 149 168 自来水中的菌落数：20400个/ml. 自来水中标准.：总菌落数100个/mL II自来水中菌群测定 一、目的： 掌握自来水中菌群的测定 二、自来水中可能含有的细菌： 大肠菌群：大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 金黄色葡萄球菌：球形，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏阳性。需氧或兼性厌氧，平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，血平板菌落周围形成透明的溶血环。产酸不产气。 青霉： （i）自来水中大肠菌群的测定 一、目的 掌握食品中大肠菌群的测定 二、材料 1、乳糖胆盐发酵管，10ml 一支 内有小导管（灭菌后备用） 2、伊红美蓝琼脂平板 3、结晶紫染液、碘液、乙醇、番红染液 三、实验操作 国家标准采用三步法，即乳糖发酵试验、分离培养和证实试验 乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产酸产气。 分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。 证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。 （一）乳糖胆盐发酵试验 （9管发酵法） 1、操作 （1）双料：10^-1,10ml,3支 单料：10^-1,10ml,3支 单料：10^-2,10ml,3支 （2）培养：36±1c，24±2h。不产气，报告