白色念珠菌侵染皮细胞引发炎症反应的机制.doc

白色念珠菌侵染内皮细胞引发炎症反应的机制 摘要：内皮细胞可以通过宿主炎症反应对抵制血液传播微生物病原菌产生重要的影响。之前，我们发现内皮细胞对体外侵染白色念珠菌通过分泌白细胞介素8（IL-8），表达选择蛋白、细胞间附生分子1（ICAM-1）、血管附生分子1（VCAM-1）。我们确定白色念珠菌刺激内皮细胞合成瘤坏疽因子a（TNF-a），他能通过自分泌机制依次诱导那些侵染细胞分泌IL-8和表达选择蛋白。VCAM-1的表达不仅受到TNF-a的调节，还有IL-1a和IL-1B的作用，所有这些内皮细胞合成的物质都是对白色念珠菌的回应。这三类细胞活素保持主要的细胞关联而不是被隐藏。ICAM-1表达的白色念珠球菌的感应与TNF-a 、IL-1a和IL-1B是独立的这些都证明了内皮细胞对白色念珠菌的不同的炎症反应是通过截然不同的机制导致的。对这些机制的一个很重要的的认知就是内皮细胞对白色念珠菌反应的治疗缓解或是对其他引起造血传播的机会致病菌的治疗。 白色念珠菌是一种造血传播的条件致病菌，能在病人体内导致严重的侵染。大多数的有这种病原菌侵染危险的病人包括嗜中性白血球减少症的癌症患者，出生重量较低的婴儿，以及那些近期做过腹内手术或静脉导管的个人。内在的中心静脉导管的作用和光谱抗生素的治疗是这种病原菌侵染额外的危险因素。随着医药技术发展的结果，造血传播的念珠菌病危险的人近几年增长很快，念珠菌属是现在从临床病人血液中分离的第四种常见的有机体。尽管抗真菌治疗不断发展，造血传播的念珠菌病的必死性仍约为38%。因为这种不能接受的高的致死率，预防和治疗这种侵染的新的方法需要加快发展。一种潜在的策略是能够提高宿主对这种侵入软组织之前，处在血管间隔时能发生血液传染的病原菌的炎症反应。据此，我们观察了白色念珠菌对内皮细胞侵入的体外实验。 根据别人及我们自己的研究，导致造血性传播的白色念珠菌侵染的模型得到了发展。首先进入了血液的有机体黏附在脉管系统的内皮细胞的细胞衬里。内皮细胞和白色念珠菌的这种直接接触特别可能发生在中性粒细胞减少或中性粒细胞功能不全患者。依附的有机体然后通过导致他们自己的吞噬作用击穿内皮细胞。吞噬作用的诱导要求完整的内皮细胞的细胞微丝和微管，它不要求有机体血清组分的调理作用。一旦在内皮细胞的细胞里面，有机体有可能伤害和最终杀害这些细胞和从而获得的深组织。内皮细胞损伤也可能导致内皮下的细胞矩阵的暴露，可以绑定其他生物。我们发现血管内皮细胞不是被动的在这处理，而是通过白细胞黏附分子的表达积极回应念珠菌的入侵，例如，细胞间粘附表示的白细胞粘附分子分子 1 (ICAM-1) ,E-选择蛋白和血管细胞黏附分子 1 (VCAM-1)。 对白色念珠菌的回应，内皮细胞还分泌白细胞介素 6(IL-6), IL-8、 单核细胞趋化蛋白 1 与前列腺素。这些炎性介质可能提高活性血管入侵白细胞的补充，他们能够帮助宿主防御。如果存在足够数量的功能白细胞，入侵的有机体可以被杀死和感染可以被中止。 因为内皮细胞对白色念珠菌的回应可能是对有机体炎症反应的数量和组成的测定很重要，我们检测白色念珠菌刺激内皮细胞分泌IL-8和ICAM-1,E-选择蛋白与VCAM-1表达。我们当前的结果表明这个有机体通过不相连的机制刺激各个不同的炎症调节子的合成。调解这些响应的机制是不同的那些调解其他微生物对血管内皮细胞的反应病原体如巨细胞病毒、 立克次氏体。这种信号转导机制的多样性可能提供内皮细胞的细胞以重要能力根据传染的有机体选择性地调整激动的反应。 材料和方法 有机体：白色念珠菌ATCC36082,一个临床分离菌株,是从美国文化收集库获得.一个萌发缺陷型白色念珠菌菌株V6 ,由Helen Buckley提供。所有的有机体都生长在25℃的酵母氮基础鱼汤另外还加有0.5%（质量/体积）的葡萄糖的培养基中摇床过夜培养。 白色念珠菌36082的3×106个/ml芽生孢子接种到RPMI1640培养基置于37℃的摇床上孵化90min用于准备被杀死的、发芽的生物。超过90%的生物体在这种条件都会产生萌发管。萌发的生物体之后暴露于室温条件下20mM的高碘酸钠溶液30min以杀死生物体。用之前加入到内皮细胞的磷酸缓冲液冲洗。部分的生物体注射葡萄糖以证明所有的生物体都已被杀死。我们之前的结论表明 内皮细胞：通过Jaffe等的方法用胶原酶收获人类脐静脉内皮细胞。他们用M-199补充10%的牛胎儿血清，10%的旧的牛血清以及2Mm的有青霉素合链霉素的谷氨酸盐的培养基培养组织生长。细胞生长在多井的组织培养皿中，上面涂上一层纤维连接蛋白。所有的实验都采用紧紧汇合三分之一的内皮细胞。根据计数板计数，大约有5×104个/cm2 所有组织的内毒素浓度和真菌培养基用鲎溶解物试验测定。在所有培养基中内毒素的浓度都低于0.1IU/m