文冠果壳苷对侧脑注射Aβ1-42 致痴呆模型小鼠学习记忆障碍的改善作用.doc

文冠果壳苷对侧脑室注射Aβ1-42 致痴呆模型小鼠学习记忆障碍 的改善作用摘 要 侧脑室注射Aβ1-42 致痴呆小鼠为模型，模型小鼠Aβ1-42 致行为学GSH/GSSG比值、MDA含量及CAT活性。结果：文冠果壳苷( 0.08 ~ 0.32mg/kg ) 显著延长新物体辨别实验中对新物体探索时间并提高优先指数；显著缩短水迷宫试验中小鼠到达安全台的时间；显著减少避暗错误次数，延长潜伏期文冠果壳苷显著提高小鼠大脑减少MDA含量、增加GSH含量GSH/GSSG比值。综上所述，文冠果壳苷显著改善侧脑室注射Aβ小鼠学习记忆障，其作用机制可能与损伤有关。 关键词：文冠果壳苷；Aβ；阿尔茨海默病Alzheimer’s disease, AD）的发病机制[1]，而现有的治疗绝大数AChE抑制剂等，临床疗效有限，因此，寻找具有综合治疗作用的抗痴呆新药仍是当今医药界有待攻破的一大难题。文冠果 (Xanthoceras sorbifolia Bge) 为无患子科文冠果属植物。一属一种，为我国特有种，在我国东北、华北、西北都有栽培，资源丰富。文冠果果仁与果壳产量比为10:8～10:9，果壳产量很大，因尚未被研究利用，基本上属废弃物。文冠果壳苷（Xanthoceraside）是一种从文冠果果壳中提取的三萜皂苷类化合物[2]，文冠果壳苷能拮抗东莨菪碱、亚硝酸钠、40% 乙醇所致的记忆获得、巩固、再现和空间辨别障碍；显著改善侧脑室注射Aβ25-35致痴呆模型小鼠的学习记忆障碍，并显著提高模型小鼠脑内的SOD及GSH-Px活性。本论文在前期工作的基础上，进一步考察文冠果壳苷对Aβ1-42致痴呆模型小鼠学习记忆障碍的改善作用及机制，为文冠果壳苷开发成治疗AD的新型药物提供依据。 1. 实验材料 1.1药品与试剂 文冠果壳苷 ( Xanthoceraside )由中科院生态所提供；：，批号2；β–Amyloid (-42) fragment：GSSG ) 及还原型谷胱甘肽 ( GSH ) 测试盒、过氧化氢酶 ( CAT ) 测试盒、总抗氧化能力 ( T－AOC ) 测试盒，均购自南京建成生物工程研究所。 1.2实验动物 昆明种小白鼠雄性体重-28 g，由沈阳药科大学动物中心提供，合格证号：SCXK辽2004-008。 1.3实验仪器 722S分光光度计上海精密科学仪器有限公司； 仪器有限公司DY89-Ⅱ电动玻璃匀浆机宁波新芝生物科技有限公司；J2-HS低温超速离心机美国BECKMAN；行为学实验装置：小鼠避暗、水迷路、装置均为制[3]及实验方案 取雄性昆明种小白鼠25～3g。将小鼠随机分，mg/kg组，文冠果壳苷0.08、0.16、0.32 mg/kg将小鼠用3.5%的水合氯醛( 10 ml/kg )麻醉后，除对照组外，每组小鼠均侧脑室一次性注入5μL凝聚态Aβ1-42（含Aβ1-42 410 pmol，以无菌生理盐水溶解，37℃ 120 h使其成凝聚态），留针1min，对照组小鼠同法侧脑室给与等体积溶剂（／的DMSO生理盐水）。测试新物体[4]进行。用测试期对新物体的优先指数来反应小鼠的记忆能力。新物体优先指数是探索新物体的时间占测试期探索总时间的百分比。 2.3 小鼠水迷宫法[5进行。每只小鼠每天训练次，间隔s。以30s内到达安全区为正确反应。记录小鼠到达安全区的时间，计算每天的平均时间和正确反应次数。[6]进行。记录24h后测验第一次进入暗室的潜伏期、5min内的错误次数和总电击时间，以此作为记忆成绩。 实 验 结 果 Aβ1-42 致痴呆模型小鼠学习记忆障碍的改善作用 3.1.1 水迷宫实验 实验结果与组相比模型组在水迷宫实验的第二天开始到达安全台的游泳时间显著延长。与模型组相比，文冠果壳苷组剂量依赖性地缩短到达安全台的游泳时间。 Fig.1. Effect of Xanthoceraside on swimming time in water maze test in mice with i.c.v. Aβ1-42 ( n = 8-10, ( x ± sd ) 3.1.2 新物体 实验结果，各组小鼠对两个相同物体的探究时间无显著差异测试期模型组小鼠对新物体和旧物体的探究时间基本相同，银杏叶片组和文冠果壳苷 0.32mg/kg 组小鼠对新物体的探究时间显著延长对物体的( 见表 1)。Table 1. Effect of Xanthoceraside on preferential index for object 1 or new object in the novel object recognition in mice with i.c.v. Aβ 1-42 ( n = 10-15, ( x ± sd ).