定量pcr技术.pptVIP

定量PCR技术 ? PCR的定量概念? 定量PCR技术在临床上应用的意义? PCR的定量原理 概念 以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，对PCR起始模板量的定量 PCR工作曲线 N＝N02n=N0(1+E)n (E?1扩增效率) logN=nlog(1+E)+logN0 假定E为常数，logN为纵坐标，n为横坐标。 则对应不同logN0值，有一组平行线。 考虑荧光检测下限和PCR反应参与物消耗，实际曲线为“S”型。 定量PCR与定性PCR测定 最根本的区别 常规PCR与定量PCR的比较 定量PCR方法 外标准法 内标准法 动力学法 极限稀释法 酶联杂交法 荧光检测法 Taqman法 Molecular beacon 法（分子信标法） 定量PCR ——外标准方法 在扩增检测待测样本的同时，扩增一系列稀释的已知标准（通常为质粒DNA） 如果在该标准稀释系列范围内，扩增产物/模板成线性相关，则可推导出同时扩增的待测样本中PCR模板的相对量 定量PCR ——外标准方法 定量PCR ——外标准方法 方法评价 优点 缺点 要求 改良方法 定量P