蟾酥丸中蟾蜍二内酯类成分的含量测定.docVIP

摘 要 目的：用高效液相色谱法分离测定蟾蜍丸中2种蟾蜍二烯内酯类化合物: 华蟾毒它灵、脂蟾毒配基成分含量。方法：利用高效液相色谱仪定量检测,以Agilent Zorbax SB-C18( 250mm×416mm, 5μm)色谱柱。流动相：乙腈- 0.5%磷酸二氢钾溶液 (55:45，用磷酸调节pH为3.2)；检测波长：296 nm。 采用高效液相色谱法可以同时测定2种蟾蜍二烯内酯类化合物的含量。该测定方法简便、可靠、准确，分离效果好，灵敏度高，适用于蟾酥丸蟾蜍二烯内酯类化合物的质量控制。对2家医疗机构、2批号样品中2种蟾蜍二烯内酯的含量准确测定了结果。 关键词 蟾蜍丸，蟾蜍二烯内酯，高效液相色谱法 目 录 一、蟾蜍二烯内酯类成分含量测定的目的和意义 4 二、蟾蜍二烯内酯类成分含量测定的实验仪器与材料 4 （一）仪器与试剂 4 （二）待测样品 4 三、实验方法步骤 5 （一）色谱条件 5 （二）对照品溶液配制 5 （三）系统适应性测试 5 （四）线性关系考察 6 （五）精密度试验 6 （六）稳定性试验 6 （七）重复性试验 6 （八）回收率试验 6 （九）样品测定 7 四、讨论 7 五、结论 7 六、参考文献 7 一、蟾蜍二烯内酯类成分中成药蟾酥丸解毒消肿，辟秽疗疮，活血定痛。疔毒恶疮、痈疽发背、附骨痈疽、乳痈乳发及无名肿毒等。现代多用于急性乳腺炎、蜂窝组织炎、全身各部的化脓性感染等属于热毒壅盛者。蟾酥丸蟾酥、雄黄、朱砂、轻粉、寒水石、枯矾、铜绿、蜗牛、麝香、胆矾、乳香、没药。其中蟾酥是蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的干燥分泌物，性辛，温;有毒。归心经。具有解毒，止痛，开窍醒神之功效。 文献报道蟾蜍丸中蟾酥的含量测定方法主要为控制蟾毒内酯成分的总含量或测定某一种蟾蜍二烯内酯类成分，采用的方法有紫外法、二阶导数光谱法、薄层法、高效液相色谱法等。本实验采用2010版药典对蟾酥的成分测量方法-高效液相色谱法，同时测定2种蟾蜍二烯内酯的含量，该方法简便、准确, 重复性好, 可用于蟾酥丸的质量控制。通过测定不同配伍方中化学成分的含量差异，可以从化学物质基础的角度揭示中药配伍减毒增效的合理性。本实验将高效液相色谱法应用于不同2家中医院配制的蟾酥丸中2 种蟾蜍二烯内酯类化合物的含量测定中，为其配伍研究提供参考。 二、蟾蜍二烯内酯类成分上海哈灵生物科技有限公司轩德堂中医( 250mm×416mm, 5μm)色谱柱。流动相：乙腈- 0.5%磷酸二氢钾溶液 (55:45，用磷酸调节pH为3.2)；检测波长：296 nm；流速：0.8 ml/min；柱温：40℃；进样体积：10μl。 （二）对照品溶液配制 取对照品华蟾毒它灵、脂蟾毒配基适量，分别精密称定，分别置于5ml量瓶中，用甲醇定容，得到浓度为50μg/ml的标准品溶液，将该溶液作为标准对照品储备液。 （三）系统适应性测试 1.取对照品溶液, 在上述色谱条件下进样分析，理论板数按华蟾毒它灵及脂蟾毒配基分别计算均不低于5500。 2.华蟾毒它灵及脂蟾毒配基二者与相邻峰的分离度均大于1.5，其结果表明样品中其他成分对华蟾酥毒基及脂蟾毒配基的测定无干扰。 3. 分析拖尾因子（T）用于评价色谱峰的对称性。上述色谱条件下进样分析结果：拖尾因子在0.95~1.05之间。 （四）线性关系考察 取照品华蟾毒它灵、脂蟾毒配基适量，分别精密称定，制成含华蟾酥毒基200μg/ml、200μg/ml的混合溶液, 作为储备液。分别精密量取混合溶液1，2，5，10，20，25 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列质量浓度的混合对照品溶液。分别精密吸取上述溶液各10μl ，按上述色谱条件进样分析。以对照品浓度(μg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，结果如表1所示。 表1 2种蟾酥成分的标准曲线、线性相关系数和线性范围 标准品 标准曲线方程 r 线性范围/μg/ml 华蟾毒它灵 Y=1.567×104X-3.140 0.9999 4 -100 脂蟾毒配基 Y=1.498×104X+3.058 0.9999 4 -100 结果表明, 华蟾毒它灵、脂蟾毒配基质量浓度在4-100μg/ml范围内，与峰面