蛋白质间相互作研究方法--技术流.docVIP

蛋白质间相互作用研究方法--技术流.txt吃吧吃吧不是罪，再胖的人也有权利去增肥！苗条背后其实是憔悴，爱你的人不会在乎你的腰围！尝尝阔别已久美食的滋味，就算撑死也是一种美！减肥最可怕的不是饥饿，而是你明明不饿但总觉得非得吃点什么才踏实。蛋白质间相互作用研究方法 确定各种可能与目标蛋白相互作用的蛋白质 .. 双杂交和其他双成分系统 第一阶段：诱饵-LexA融合蛋白的鉴定 诱饵-LexA融合蛋白的构建 1．将编码诱饵蛋白的靶DNA克隆到LexA融合载体的多聚接头处，以合成一种框架内的LexA 融合基因。确定诱饵序列的羧基端存在翻译终止序列。形成的质粒作为pBait。 2．采用下列LexA融合基因和lexAop-lacZ报道质粒的组合，建立一系列EGY48 lexAop-LEU2 选择的转化酵母菌： a. pBait + pMW12（活化测定） b. pSH17-4 + pMW12（活化的阳性对照） c. pRFHM1 + pMW12（活化的阴性对照） d. pBait + pJK101（抑制/DNA结合测定） e. pRFHM1 + pJK101（抑制的阳性对照） f. pJK101单独（抑制的阴性对照） 3．将每种转化混合物铺在适宜的选择性缺陷板上：CM(Glu)-Ura-His（针对质粒组合a~e） 或C