chapter03克隆载体技术总结.ppt

①由M13噬菌体的衍生而来，基因组8.7kb； ②结构组成：带有一个有来自p15A质粒的复制起点；带有一个有来自转座子Tn903的卡那霉素抗性基因（Kanr）；基因II有一个G-T突变。 ③M13K07进入细胞后复制成双链，表达产生子代单链噬菌体所必须的所有蛋白即包装蛋白。 1）辅助噬菌体M13K07 （4）pBluescript 噬菌粒载体（pBS） Stratagene公司发展的一类噬菌粒载体。 由pUC质粒载体、f1噬菌体的复制起点和T3、T7噬菌体的启动子组成。 ② 特点 ① 组成 MCS两侧分别加上T3和T7噬菌体的启动子。加入适当的噬菌体RNA聚合酶，就可以定向体外转录。 1）定向体外转录 2）两种复制模式 既能以质粒的形式复制，又能以噬菌体的形式复制包装。 3）选择方便 有Ampr和lacZ’，可以进行Amp抗性选择和X-gal-IPTG蓝白斑选择。 4）插入方便 18个单一酶切位点的MCS SK：表示lacZ’的转录方向是沿MCS上的 SacI ? KpnI +（f1+）：单链复制起始方向背离 lacZ’，能回收lacZ’的编码链（+） pBluescript SK（+/-）/pBluescript KS（+/-） KS：反向（ KpnI ? SacI ，MCS相反） -（f1-）：能回收lacZ’的非编码链（-） 1）