实验五、微生物的分离、接种及培养法.doc

实验五 微生物的分离、接种及培养法 目的要求 1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。 2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。 实验原理 常用的分离方法有： 1 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。 土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。 微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。 三 实验材料 1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。 2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、 3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。 实验内容与步骤 1. 平板划线分离法 借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到 倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录 （1 倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静 （2 含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直 （3 划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻 37℃，培养24-48 小时，观察 2.稀释平板分离法 ：采用稀释手段，使样品分散到最低限度，然后吸取一定量注入平皿内，倒入 （1 制备土壤稀释液：（细菌的分离）以无菌操作，称取样品 10g，加入装有 90ml 无菌水的锥形瓶 10-20 分钟，使土样与水充分混合，即成 10 -1 土壤稀释液，然后在酒精灯火焰旁，用无 1ml10 -1 的稀释液注入 9ml 无菌水的试管内，制成 10 -2 的稀释液。用同样方法再制成10 -3 ，10 -4 ，10 -5 ，10 -6 的稀释液。 10 -6的稀释液开始吸取 1ml 的 10 -6稀释 10 -6 的无菌培养皿内，以相同方法分别吸取 1ml 的 10 -5 、10 -4 的稀释液加到相应 10 -5 、10 -4 的无菌培养皿内。 10 -4 、10 -5 、10 -6 稀释度，测定放线菌数量时，采用 l0 -3 、10 -4 、10 -5 稀释度，测定真菌 10 -2 、10 -3 、10 -4 稀释度。 2 平板的制作：将固体培养基融化，待冷却至 45-50℃左右，分别倾入已盛有 10 -4 、10 -5 、10 -6 稀 37℃恒温箱中，培养24-48 小 （二）微生物的接种方法 将有菌的材料或纯粹的菌种转移到另一无菌的培养基上，这个过程就称为接种。 常用的接种方法如下： 1.斜面接种：从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。 2.液体接种：由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或 3.穿刺接种：用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿原路拔出， 4.平板接种：将菌种接至培养皿的方法，平板接种的目的是观察菌落形态、分离纯化菌种，活菌 不同微生物在特定培养基上形成的菌落 （1 斜面接平板 a.划线法：见平板划线分离法。 b.点种法：一般用于观察霉菌和酵母细胞，轻轻点在平板的表面（根霉点一点，曲霉、酵母可点 3-4 点）即可。 2 平板接斜面：一般是将经平板分散培养得到的单菌落接种到斜面，以便作鉴定或扩大培养、保 [注意事项] 不同种类的微生物，其培养温度、培养时间有所不同。 实验报告 1．观察划线分离的菌落形态。 ．稀释分离时，为何要将融化的培养基冷却到 50℃左右，才倒入装有菌液的培养皿内？