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实验四 培养基的制备与灭菌 目的要求 1.要求通过实验，掌握细菌、放线菌和真菌三种不同类型微生物的培养基制备方法。 2.了解高压蒸汽灭菌法的原理，学会干热灭菌和高压蒸汽灭菌技术。 内容与步骤 [培养基的制备过程] pH 值→过滤→分装→灭菌 [操作要点] 1．加热溶化 2.调节 pH 值 pH 时，不用调节，否则必须调节才能满足需要。一般做法是：培养基溶解 pH 试纸测 pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1molHCl和 1molNaOH）， 3.分装 （1）斜面：装量为管长的 1/4-1/5。 2）液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的 1/3。 3）三角瓶：装量不超过容积 1/2。 4.灭菌塞棉塞，包扎，灭菌。 是在密闭的加热容器内进行， 加热使容器内的水产生蒸汽， 由于密闭， 100℃的蒸汽温度,杀灭培养基中所有微生,达到完全无菌。 1 营养琼脂培养基 3g, 蛋白胨 10g, NaCl 5g ,琼脂 15-20g, 水 1000ml, pH7.0-7.2, 2 灭菌20 分钟。 2.淀粉琼脂培养基（即高氏 1 号，培养放线菌用） 20g, KNO3 1g, NaCl 0.5g, K2HPO4 0.5g, MgSO4 0.5g， FeSO4 0.01g, 琼脂 20g ， 1000ml, pH7.0-7.2, 2 灭菌 20 分钟. 1000ml。 3.马铃薯培养基 一般用于真菌培养 去皮 200g, 蔗糖或葡萄糖 15g, 琼脂 1520g, 水 1000ml. 4.蛋白胨水培养基（用于吲哚试验） 20g ,NaCl 5g ,水 1000ml, pH7.6, 2 灭菌 20 分钟 5.葡萄糖蛋白胨水培养基（用于 M.R 和 V.P 试验） 5g, 葡萄糖 5g ,K2HPO4 2g, 蒸馏水 1000ml 1000ml 水中，调 pH7.0-7.2，过滤，分装试管，每管 10ml，灭 30 分钟。 6.柠檬酸盐培养基 NH4H2PO4 1g, K2HPO4 1g, NaCl 5g, MgSO4 0.2g, 柠檬酸钠 2g, 琼脂 15-20g, 蒸馏水 1000ml, 1%溴麝香草酚蓝（酒精液） 10ml. pH6.8，然后加入指示剂，摇匀，用脱脂棉过滤，制成后为黄绿色， ，灭菌 20 分钟后制成斜面。 7.硝酸盐液体培养基 1000ml, KNO3 1g, pH 7.0-7.6 将上述成分加热溶解，调 pH7.6，过滤，分装试管，15 磅/英寸 2，灭菌 20 分钟。 8.明胶培养基 1000ml, 明胶 12-18g pH7.2-7.4，间歇灭菌或灭菌 20 分钟 。 9.HS 试验用培养基 20g ,NaCl 5g, 柠檬酸铁铵 0.5g, Na2S2O3 0.5g, 琼脂 15-20g, 蒸馏水 1000ml, pH 7.2 60℃加入其他成分，分装试管，灭菌 20 分钟。 [注意事项] 不同用途的培养基，所要求的 pH 和灭菌温度有所不同。 思考题 1.配制培养基要注意哪些问题？配制培养基为什么要调 pH 值？ 2.为什么牛肉蛋白胨培养基不加矿物盐类？ 3.分离真菌用的培养基有何特点？