侵染百合的主要病毒的检测及其分子生物学的(孙健2005)试卷.doc

分类号 密级 UDC 编号 学位论文 Lily mottle virus（LMoV）、Lily symptomless virus（LSV）和Cucumber mosaic virus（CMV）多重RT-PCR检测体系的建立以及LMoV-SMi、LSV-SMi基因组全序列的扩增 Development of multiplex RT-PCR detected system for Lily mottle virus, Lily symptomless virus and Cucumber mosaic virus, and amplication of complete genomic RNA of LMoV-SMi and LSV-SMi 孙 健 指导教师 李 凡 副教授 陈海如 教 授 申请学位级别 学科专业名称 论文提交日期 论文答辩日期 年 月 日 学位授予单位和日期 云 南 农 业 大 学 年 月 日 答辩委员会主席 评 阅 人 云南农业大学 二O 年 月 目 录 摘要 I Abstract III 1 文献综述 1 1.1 百合的价值、分布以及生产现状 1 1.1.1 百合的地理分布 2 1.1.2 百合栽培历史及生产现状 2 1.2 危害百合的主要病毒 3 1.2.1 百合斑驳病毒（Lily mottle virus，LMoV） 4 1.2.2 百合无症病毒（Lily symptomless virus，LSV） 6 1.2.3 黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV） 7 1.3 百合病毒检测技术研究进展 10 1.4 研究目的和意义 14 2 材料与方法 15 2.1 材料 15 2.1.1 毒源 15 2.1.2 菌株及载体 15 2.1.3 引物设计 15 2.2 分子生物学常用酶和试剂 15 2.3 常用缓冲液的配制及主要仪器设备见附录。 15 2.4 方法 15 2.4.1 百合病毒病症状类型 15 2.4.2 电子显微镜检测 16 2.4.3 多重RT-PCR检测三种主要百合病毒种类 16 2.4.4 LMoV和LSV全序列扩增 18 3 结果与分析 23 3.1 百合病毒病主要症状类型 23 3.2 电子显微镜检测结果 23 3.3 多重RT-PCR检测结果 24 3.3.1 多重RT-PCR检测体系的建立 24 3.3.2 利用多重RT-PCR检测百合中三种主要病毒 25 3.4 LMoV-SMi分离物全序列扩增及序列分析 26 3.4.1 LMoV全序列克隆及序列测定 26 3.4.2 LMoV不同分离物之间的序列比较结果 27 LMoV中国不同地区分离物CP基因序列比较 27 国内外不同地区LMoV分离物CP基因序列比较 30 LMoV不同地区分离物3′端非编码区的序列比较 32 3.4.3 LMoV-SMi与侵染百合的Potyvirus分离物基因序列的比较 32 3.4.4 LMoV-SMi CP特性预测以及空间结构预测 35 LMoV-SMi CP特性预测 35 LMoV-SMi CP表位预测 36 LMoV CP的二级结构和三级结构预测 38 3.5 LSV-SMi分离物基因组全序列扩增及分析 39 3.5.1 LSV-SMi分离物全序列克隆及序列测定 39 3.5.2 LSV不同分离物之间基因序列比较结果 41 LSV不同地区分离物全序列的比较 41 LSV中国不同地区分离物CP基因序列的比较 41 LSV国内外不同地区分离物CP基因序列比较 42 3.5.3 LSV-SMi CP特性预测以及空间结构预测 44 LSV-