杨树原生质体融合的研究.doc

杨树原生质体融合的研究 作者：童威 导师：诸葛强 摘要：本文以南林895杨(Populus×euramericana cv‘Nanlin895’)、转Bt基因南林895杨和银白杨(P.alba)为材料，在建立悬浮细胞系及植株再生的基础上，开展杨树原生质体分离和电融合研究，筛选适合杨树原生质体分离与纯化、原生质体电融合及杂种筛选和培养等条件、方法。旨在为杨树体细胞杂交种质创新研究提供实验依据。主要研究结果如下：幼嫩茎段较适合诱导愈伤组织。愈伤诱导培养基为：MS+2,4-D 2mg/L。将诱导出的愈伤组织转入愈伤继代培养基：MS+2,4-D 2mg/L+KT 0.2mg/L，经4~5次继代培养后获得淡黄色、结构疏松的胚性愈伤组织，将其转入液体培养基：MS+2,4-D 2mg/L+NAA0.2mg/L+KT 0.1mg/L+水解酪蛋白500mg/L，建立杨树悬浮细胞系。 关键词：杨树；原生质体分离；电融合 In this paper,Populus×euramericana cv‘Nanlin895’,transgenic Populus×euramericana cv‘Nanlin895’with Bt gene and P.abla were used as experiment materials,on the base of the establishment of suspension culture and plant regeneration,we studied protoplast isolation and protoplast electofusion in poplar,selected the optimum conditions and methods for the protoplast isolation,protoplast purification,protoplast eletrofusion,protoplast culture and selecting the somatic hybrids.The main results described as follows: The plantlet twigs were feasible to induce callus.The medium for callus inducement was MS+2,4-D 2mg/L.The induced calli were transferred into the medium for callus subculture MS+2,4-D 2mg/L+KT 0.2mg/L.The calli become light yellow and texture short after 4-5 subculture periods,which were used to establish cell suspension culture of poplar with the liquid medium MS+2,4-D 2mg/L+NAA 0.2mg/L+KT 0.1mg/L+CH 500mg/L; Keys words：Poplar;Protoplast isolation Electrofusion 1.杨树原生质体的融合 实验材料: 实验材料为本实验室的南林895杨(Populus×euramericana cv‘Nanlin895’)、转Bt基因南林895杨、银白杨(P.alba)组培苗，分别取其茎段、叶柄和叶片作为外植体。 1.1．植物细胞悬浮培养 植物细胞培养的概念包括植物器官，组织，细胞，原生质体及胚的培养，其核心理论依据是植物细胞的全能性，他包括植物细胞的“形态全能性”（Steward F C et al.,1964）和“化学全能性”（Zenk M H et al.,1975）两个方面的概念，即植物体的任何一个细胞都包含有整株植物全部的遗传信息，在一定条件下具有发育成一个完整的植株的能力。植物细胞悬浮培养即植物细胞或小的细胞聚集体在液体培养基中于摇床上进行悬浮培养，这些细胞和小聚集体来自愈伤组织，某个器官或组织，甚至幼嫩的植株，通过物理或化学的方法进行分离获得（路铁钢和叶和春，1995）。 愈伤组织或悬浮愈伤组织作为原生质体培养的起始材料，有其它材料所不及的优越性:一是获得的原生质体产量高；二是分离的原生质体再生能力强，能够在培养过程中持续地分裂并保持较强的器官分化能力；三是重复性良好。因此，获得良好的愈伤组织是原生质体分离、培养及细胞融合的基础。 1.2.植物原生质体分离和培养 选用时应根据植物材料和酶制品的特性进行综合考虑 。此外，还必须控制好酶解条件。影响酶解