热处理生成大蒜Diallyl Trisulfide之γ.docVIP

熱處理生成大蒜Diallyl Trisulfide之γ-GCS 誘發作用之探討 Study heat treatment on the formation of diallyl trisulfide from garlic and induction of gamma-glutamylcysteine synthetase mechanism 研究生：劉盈怡 Liou, Ying-Yi 指導教授：黃卓治 Huang, Tzou-Chi 【摘要】 大蒜 Alium.sativum 中三個主要有機硫化合物 garlic organosulfur compound, OSCs : 二烯丙基硫化物 Diallyl sulfide, DAS 、二烯丙基二硫化物 Diallyl disulfide, DADS 、二烯丙基三硫化物 Diallyl trisulfide, DATS 具有生理活性，包含了有抗腫瘤、抗粥狀動脈硬化、血糖調節與抗菌活性等。許多文獻研究指出研究結構與活性的關係，在OSCs結構中含三個硫有助於其生理活性。但熱處理使含三個硫的DATS隨加熱時間降為雙硫再減為單硫的化合物。因此本實驗為避免傳統使用有機溶劑萃取而殘留具有毒性，利用低溫超臨界CO2萃取技術，於經由適度加熱的大蒜泥中，成功萃取出主要成分為DATS之萃取物。並於細胞模式探討大蒜及其含硫化合物調控人類肝癌HepG2細胞中氧化還原平衡及異物代謝酵素之影響。結果顯示DATS誘可強力誘發數個phase II之酵素mRNA表現。而GSH在細胞解毒功能與維繫氧化還原平衡上扮演重要的角色，發現DATS能誘發γ-GCS-HS解毒酵素與GSH表現。另外因提出OSCs進入細胞中會形成一種壓力訊號，發現GSH的表現與ROS的生成或許有相關性，進一步的研究其誘發解毒酵素機制。轉錄因子NFκB與Nrf2在γ-GCS-HS基因上游的啟動子區出現。Nrf2可啟動與antioxidant response element 相關的許多抗氧化基因表現，本研究利用免疫螢光分析法結果證實DATS可活化細胞中Nrf2，使其由細胞骨架蛋白Keap1分離，由細胞質進入核內。但NFκB無法進入核中，因此推論有機硫化合物可能主要經由活化Nrf2進入核內，進一步啟動γ-GCS-HS基因表現，造成細胞中γ-GCS-HS蛋白質的生成，使細胞產生GSH而能對抗氧化傷害等而進行保護作用。 關鍵字：大蒜有機硫化合物、二烯丙基三硫化物、熱處理、麩胱甘肽、γ-GCS、Nrf2 【Abstract】 Epidemiological evidence indicates clinical and laboratory studies have show that allyl sulfur compounds such as diallyl sulfide DAS , diallyl disulfide DADS , and diallyl trisulfide DATS , are the major active constituents found in crushed garlic Alium sativum . Their biological activities include antitumorigenesis, antiatherosclerosis, blood sugar modulation and antibiotics. The structure-activity relationship study indicated that the third sulfur in the structure of OSCs contributed substantially to their bioactivities. Heat treatment of garlic oil increased the level of DATS. Supercritical CO2 extractor was used to isolate DATS. The result showed DATS in human hepatoma HepG2 cells elicited the strongest inductive effect of several phase II enzymes mRNA. It was demonstrated that DATS could remarkably induce both γ-GCS-HS gene and protein expression. Intracellular glutathione level increased in paralle