实验七污水中噬菌体的分离与效价测定案例.pptVIP

实验七 污水中噬菌体的分离、纯化与效价测定 实验目的 掌握噬菌体分离的基本原理和方法 学会观察噬菌斑 了解噬菌体纯化、效价测定方法 基本原理 噬菌体是专性寄生物，必需寄生细菌才能繁殖，伴随细菌的分布而分布，只要有细菌的地方，就有噬菌体 噬菌体颗粒可以在环境中独立存活，但不能繁殖 噬菌体对宿主的寄生通常具有特异性 温和噬菌体和烈性噬菌体 烈性噬菌体在液体中，可以使浑浊的菌液变为澄清 烈性噬菌体在固体琼脂平板，可以形成透明的噬菌斑 利用噬菌体斑的特征可以分离、纯化、效价滴定 噬菌斑的形成 在固体琼脂培养基上，噬菌体感染细菌后，在宿主细胞内进行核酸和蛋白质的生物合成，最后装配成噬菌体完整的颗粒，通过裂解宿主细胞释放出来，使感染的细菌不能生长，从而形成肉眼可以观察到的透明或浑浊的空斑，称为噬菌斑。 噬菌体的初次分离 将可能含有宿主菌的材料在液体培养基中过夜培养，然后将液体培养液过滤除菌，滤液备用。 将宿主菌涂布在平板表面，自然干燥。 取滤液10μl滴在平板上，过夜培养，如果有针对该宿主菌的噬菌体，则可以看到透亮的抑菌圈。 问题 如果采用这种方法，看不到抑菌圈，可以 说明的是哪些情况？ 如何进行噬菌体的纯化 挑取单一清晰可见的单个噬菌斑，接种液体培养基，并加入相同指示菌，重复上述从加入氯仿开始的各个试验步骤，得到噬菌斑 重复多次，可以得到由一个噬菌体的后代形成的噬菌