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- 2017-06-08 发布于重庆
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ctab-method
CTAB法抽提水稻DNA
试剂
①1.5xCTAB Hexadecyltrmethyl amnonium bromide 1.5% W/V CTAB 75mM Tris-Hcl PH8.0 15mM EDTA 1.05M Nacl
②10%CTAB
③沉淀液 1%CTAB 50mMTis-Hcl PH8.0 10mM EDTA
④chloroform/isomyl alchol 24:1 ⑤高盐TE 1M Nacl 10mMTris-Hcl PH8.0 1mM EDTA
⑥TE
⑦无水乙醇
⑧70% 乙醇
方法 以一管4-6g为例 ①将冷冻磨碎的材料移入50ml离心管,让液氮挥发掉,加入20ml的CTAB提取液 预热到80℃ ,摇匀,在56℃水浴中保温15-20分钟,并经常摇几下。
②用20ml的氯仿/异戊醇(24:1)抽提5分钟,4500rpm、室温下离心10分钟。
③移上清液至另一离心管,加入1/10量的10%CTAB液,摇匀。
④有等量的氯仿/异戊醇抽提5分钟,离心10分钟,4500rpm。
⑤移上清液至另一离心管,并加入等量的CTAB沉淀液,摇匀,室温放置10-15分钟
⑥离心10分钟,4000rpm
⑦弃上清液,加入3-5ml高盐TE和3μl RnaseA,溶解。
⑧加入2倍体积无水乙醇,摇匀。勾出DNA,置于1.5
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