实验紫外诱变剂突变菌株的复筛分析.ppt

实验4 紫外诱变剂突变菌株的复筛 一、实验目的 进一步对淀粉酶菌株进行筛选，定量确定为高产淀粉酶生产菌。 二、实验原理 琼脂平板活性测定方法可以简便、快速进行初筛，节约大量时间，但是难以得到确切的产量水平，只适合于初筛。 初筛具有不稳定性，要进一步确定生产优良性状的菌株就有必要对其进行摇瓶复筛，定量确定其生产水平，更为准确地确定优良性状的菌株。 二、实验原理 淀粉水解产物（还原糖）能与3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂反应，使其还原生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。 在一定范围内，其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比，可用葡萄糖浓度表示。 用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位体积（ml）样品在一定时间内生成的葡萄糖的量（mg）表示酶活力。 ?? 三、实验步骤 1. 正突变菌株的摇瓶培养（为后续稳定性实验准备） 液体培养基分装（10ml/瓶，每组1瓶） 取1ml菌液（以10%接种量）进行接种，摇床扩大培养24 h。 2. 发酵液的离心 将摇瓶中剩余菌液转移至离心管中，1500rpm离心10min，保留上清备用。 三、实验步骤 3. 配制1%DNS试剂： 精确称取3,5-二硝基水杨酸1g，溶于20ml 2mol/L 的NaOH溶液中，加入50ml蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100ml。 各实验室值日的小组负责配制各实验室本次实验所需的DN