蛋白质醣基化分析平台之开发及其在醣蛋白质体学之应用.docVIP

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2017-06-08 发布于重庆
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蛋白质醣基化分析平台之开发及其在醣蛋白质体学之应用.doc

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蛋白质醣基化分析平台之开发及其在醣蛋白质体学之应用

蛋白質醣基化分析平台之開發及其在醣蛋白質體學之應用 Development of efficient platform for large-scale glycoprotein analysis and its applications on glycoproteomics 研究生： Chia-Hao Yeh 指導教授：【摘要】醣蛋白在分子及細胞間扮演著重要的角色，除了影響細胞附著、遷移和生長，更牽涉癌症的發展與免疫反應的發生。但醣基結構的複雜、醣基化程度的歧異（glycan heterogeneity）與醣基不易帶正電等因素往往造成質譜分析的挑戰，進而限制醣蛋白質體研究的發展。本研究的目的將針對大規模的醣蛋白質體建立高通量的分析平台。首先，開發出可快速純化醣基化胜肽的分析載具，利用合成的兩性離子高分子（zwitterionic polymer）搭配微奈米磁珠，以親水性作用層析（hydrophilic interaction liquid chromatography, HILIC）的機制，快速且特異性的純化醣基化胜肽，避免非醣胜肽在質譜上的訊號抑制。並利用此純化載具，搭配酵素及化學去醣方法，開發出簡單可靠的醣位點鑑定方法，大規模地分析複雜樣品中的 N-鍵結醣基化位點。分別以液相層析電噴灑質譜（LC ESI-MS/MS）及介質輔助雷射脫附游離—飛行時間質譜（MALDI-TOF）檢測純化後醣基化胜肽及酵素去醣之後的胜肽訊號。本研究為精確鑑定醣位點，由H218O穩定同位素標記驗證是否為酵素切去醣後之胜肽，並得到醣位點的資訊。此方法更進一步地應用於尿液檢體，由大規模醣基化位點的分析，探討醣基化差異與生理狀況之關聯。關鍵字：【Abstract】 Keywords：glycoprotomic, HILIC, glycopeptides, glycosylation site 1