论文名称(中文) 以in vitro及in vivo方式探讨登革病毒二型所诱发自噬.docVIP

論文名稱 中文 以in vitro及in vivo方式探討登革病毒二型所誘發自噬現象之特性 論文名稱 英文 Characterization of Dengue Virus Type 2 Induced Autophagy Both in vitro and in vivo 研究生 中文 胡瑄耘 研究生 英文 Hsuan-Yun Hu 中文摘要 登革病毒 Dengue virus 每年約造成一億人口的感染，其所造成的疾病可以由輕微的登革熱 Dengue fever 到較嚴重的登革出血熱 Dengue haemorrhagic fever 以及登革休克症候群 Dengue shock syndrome ，甚至死亡。最近的研究指出登革病毒感染會誘發自噬現象 autophagy ，其是一種細胞中的恆定反應，主要負責清除累積於細胞質當中聚集、半衰期長的蛋白，以及一些受損的胞器。登革病毒所引發的自噬現象可以調控脂肪代謝並且加強病毒的複製。然而，對於病毒本身以及病毒NS1蛋白在登革病毒誘發的自噬現象中是否有所影響，以及是否在活體中登革病毒也可以誘發自噬現象是我們所想探討的。我們的研究利用質體ptfLC3 tandem fluorescent-tagged microtubule-associated protein 1 light chain 3 以及質體pRLucC124A-LC3wt證實登革病毒會驅使完整的自噬流體現象 autophagic flux 。進一步利用曠時螢光顯微鏡方式，觀察質體ptfLC3在登革病毒感染的Huh7細胞中的變化。我們發現在登革病毒感染早期誘發短週期的自噬流體 約三小時 ，而在感染晚期則會有延長週期的現象 約六小時 。此外，我們發現登革病毒的NS1蛋白並不會隨著自噬流體現象而被分解。先前的研究指出NS1蛋白會和LC3蛋白有共處 co-localization 的情形，並且參與病毒的複製。大量表現NS1蛋白並不會誘發自噬現象。然而，登革病毒的非結構性蛋白會參與病毒的複製。登革病毒複製子 replicon ，其只具有非結構性蛋白，即會誘發自噬現象，顯示病毒的複製以及非結構性蛋白與誘發自噬現象有關。先前的研究指出C型肝炎病毒會經由不完全摺疊蛋白反應 unfolded protein response 而誘發自噬現象。登革病毒已經被報導會引起內質網壓力 ER stress 。我們證實了登革病毒感染Huh7細胞會引發內質網壓力。在給予內質網壓力的抑制劑 4-phenyl butyric acid 後，登革病毒所引發自噬現象也被抑制了，此結果顯示登革病毒所引起的內質網壓力參與在病毒造成的自噬現象當中。動物實驗的研究中，我們將登革病毒以顱內注射的方式感染出生六天大的仔鼠。研究結果顯示在登革病毒感染後五天的小鼠腦中可以觀察到LC3 II的增加並且與NS1有共處的情形。此外，利用穿透式電子顯微鏡觀察到有類自噬泡 autophagosome like vesicles 的存在，皆證實了登革病毒在活體中會引起自噬現象。最後我們證實利用自噬現象的抑制劑 3-methyladenine 抑制自噬現象的發生，會減緩登革病毒感染造成小鼠病程的發展，並且伴隨著NS1蛋白表現下降以及病毒量的減少。總而言之，此研究證實登革病毒的感染會引發多重週期的自噬流體現象，並且內質網壓力參與在誘發自噬現象的發生，而NS1則沒有。最後證實登革病毒感染在活體中會引起自噬現象，此現象會影響疾病病程的發展。 英文摘要 Dengue virus DV causes about 100 million people infection every year. DV disease ranges from mild dengue fever DF to severe dengue haemorrhagic fever DHF , dengue shock syndrome DSS and death. DV infection induces a cellular homeostasis response, autophagy, which is responsible for the degradation of long-lived proteins, aggregated proteins and damaged organelles. DV induced-autophagy regulates lipid metabolism of the host cell to enhance its replication. However, how DV induces autophagy, whether DV NS1 gene