论文名称(中文) 以X光小角度散射技术探讨化脓性链球菌氧化压力调控.docVIP

論文名稱 中文 以X光小角度散射技術探討化膿性鏈球菌氧化壓力調控因子PerR在溶液中之構形 論文名稱 英文 Structural Studies of the Streptococcus pyogenes PerR by Solution Small-Angle X-ray Scattering 研究生 中文 邱穫升 研究生 英文 Huo-Sheng Chiou 中文摘要 化膿性鏈球菌 Streptococcus pyogenes 是感染人類的重要病原菌，其感染時可在含氧量充足的宿主環境進一步導致侵入性及高危險的疾病發生，如壞死性筋膜炎 Necrotizing Fasciitis 、鏈球菌中毒性休克綜合症 Streptococcal Toxic Shock Syndrome 。在臨床檢驗及早期研究上皆指出了，不具有?過氧化氫酶 catalase 的S. pyogenes確有抵禦由reactive oxygen species ROS 所衍生氧化壓力 Oxidative stress 的能力，使其得以存活於高氧化壓力的環境中。另外，在動物感染模式研究下亦證明了，氧化壓力與細胞內外金屬離子的恆定對於S. pyogenes的毒力因子表現及致病機轉有著關鍵性影響。故充分了解不具過氧化氫酶的S. pyogenes如何在感染過程中調控氧化壓力平衡而維持自身生長是一個有趣的研究方向。本篇主要以小角度X-ray散射技術 Small-Angle X-ray Scattering 探討氧化壓力調控因子PerR在溶液中的構形，進而了解其分子調控機制。PerR是一種需金屬離子協助的轉錄調控因子，有研究證明了在過度金屬離子和hydrogen peroxide stress的環境下，PerR可以直接調控Dpr蛋白的表現，來幫助S. pyogenes抵禦氧化壓力，故可透過Dpr promoter region來觀測PerR結合DNA的能力。在實驗室先前研究中我們確認了S. pyogenes PerR在溶液中具有結合DNA的能力且成功的解構了S. pyogenes PerR，但比較目前研究較深入的B. subtilis PerR後，我們發現S. pyogenes PerR與B. subtilis PerR在inactive狀態下的結構相似，為了釐清是否在結晶過程中造成了這個矛盾，我們利用了小角度X-ray散射技術，透過這項技術可以探知蛋白質在溶液狀態下的構形。從小角度X-ray散射的結果指出，S. pyogenes PerR的晶體結構和溶液中的構形是一致的，進一步證明了先前晶體結構下的S. pyogenes PerR具有結合DNA的能力。另一方面，我們也發現在後續由M9 medium表現出的S. pyogenes PerR在溶液下不具有結合DNA的能力，但當環境存在鋅離子時，S. pyogenes PerR可以恢復其DNA結合能力。綜合上述實驗結果，我們相信S. pyogenes PerR擁有和B. subtilis PerR一樣的活化模式，需要藉由結合金屬離子來活化其結合DNA的能力，而由M9 medium表現出的S. pyogenes PerR為inactive的狀態，當結合環境金屬離子後，會產生構形轉變而成為active的狀態。 英文摘要 Streptococcus pyogenes is a strictly human pathogen that causes severe and invasive diseases in oxygen-rich host environment. However, previous studies indicate S. pyogenes does not produce catalase but has a robust ability to resist killing by reactive oxygen species ROS . Also, the survival and virulence of S. pyogenes correlates with the regulation of oxidative stress and metal homeostasis. Therefore, how S. pyogenes adapts to ROS stress during infection is an interesting question. The peroxide response regulator, PerR, is a metal-binding transcriptional regulator that controls gene exp