福林-酚法測定蛋白质含量教案.docVIP

2010级生化实验 将梦想注入生命，绽放精彩！ 福林-酚法测定蛋白质含量 目的要求 1．掌握福林-酚法测定蛋白质含量的原理及操作步骤。 2．进一步熟悉使用分光光度计的操作。 实验原理 在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜复合物。该复合物随后将磷钼酸-磷钨酸还原，发生显色反应，产生蓝色（钨兰+钼兰）。蓝色的强度在蛋白质浓度为25~250μg/mL之间时与蛋白质的含量成正比。 根据多组标准蛋白质溶液与福林-酚试剂反应后所测得的吸光度，绘制标准曲线。以此便可求出未知蛋白质溶液中的蛋白质含量。 仪器与试剂 仪器 分光光度计、试管与试管架、吸量管与洗耳球等 试剂 试剂甲：A 液——10 g Na2CO3，2 g NaOH和0.5 g 酒石酸钾钠溶于500mL蒸馏水中。 B液——0.5 g CuSO4·5H2O 溶于100mL 蒸馏水中。 试剂甲即为将两溶液以A：B=50:1的比例混合后所得的混合溶液。 试剂乙：在1.5升的磨口回流瓶中加入100 g 钨酸钠（Na2WO4·2H2O），25 g钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）及700mL蒸馏水，再加入50mL 85%磷酸，100mL浓盐酸，充分混合，接上回流冷凝管以小火回流约10小时。回流结束后加入150 g硫酸锂，50mL蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟一边驱除过量的溴，冷却后溶液呈黄色。注意