器官移植的实验诊断.docVIP

器官移植的实验诊断 器官移植的相关概念 供体 donor 与受体或宿主 recipient/host 宿主抗移植物反应 host versus graft reaction/disease, HVGR/D 与移植物抗宿主反应 graft versus host disease, GVHD 主要组织相容性复合物 major histocom-patibility complex, MHC 与主要组织相容性抗原 MHA /人类白细胞抗原 human leukocyte antigen, HLA , 引起最主要最严重的排斥反应 移植前检测 ⒈血型鉴定： ABO血型：正反定型 Rh血型：弱D型 ——遵循输血原则，避免预存抗体导致的超急排 ⒉HLA配型：HLA-A、B、C、DRB1、DQB1 高分辨分型 high resolution ：骨髓移植 低分辨分型 low resolution ：心/肺/肾移植 HLA基因分型技术 序列特异性引物法（Sequence Special Primer，SSP） 序列特异性寡核苷酸探针法（Sequence special oligonucleotide probe，SSO） DNA序列测定法（Sequencing-Based Typing，SBT） Luminex流式技术-序列特异性寡核苷酸探针反向杂交法（FLOW-SSOP ） 基因芯片或微阵列技术（Genechip） ⒊群体反应抗体 panel reactive antibody, PRA ? ELISA法：用已知抗原检测特异性抗体，根据机体免疫状况选择供者，决定手术时机。识别不可接受的抗原型别 未致敏:0-10%；轻度致敏:11-30%；中度致敏:31-50%；高度致敏:＞51% ⒋淋巴细胞毒交叉试验 complement dependent cytotoxicity ,CDC 方法：受者血清+供者淋巴细胞 混合/T/B淋巴细胞） 混合淋巴细胞死亡数＜10%→阴性，＞50%→阳性10~50%时参照患者PRA及供者HLA相合程度 T淋巴细胞毒反应→ 10%→阳性 B淋巴细胞毒反应→ 10%阳性→酌情考虑 ——阳性者为肾移植禁忌 移植后常见检测项目 移植排斥反应 HVGR 监测 PRA检测：指导用药，监测排斥 外周血T细胞及其亚群检测 T细胞总数、CD4+T细胞、CD8+T细胞 CD4+/CD8+T细胞↑ ＞1.2→排斥机会↑ CD4+/CD8+T细胞↓ ＜1.08→感染机会↑ NK细胞毒活性监测：急性排斥发生→NK细胞毒活性↑ 细胞因子及粘附分子测定：急性排斥发生→ IL-2、4、6、IFN-γ、TNF 骨髓移植后GVHD监测 嵌合状态检测 动态观察和评价受者植入状态的有效指标 染色体核型分析 红细胞抗原 HLA 限制性长度片段的多态性 RFLP 可变数目串联重复序列 VNTR 微卫星DNA / 短串联重复序列 short tandem repeats,STR ：23对染色体上选取16个特异性位点 完全嵌合——混合嵌合——受者型 移植失败 其它实验室检测：骨髓象、肝功、三大常规等 感染监测 病毒感染：巨细胞病毒CMV，EB病毒、单纯疱疹病毒HSV，带状疱诊病毒VZV ——抗原检测：免疫组化、PCR ——抗体检测：ELISA 细菌感染：G-菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌 ——涂片镜检、细菌培养、药敏试验等 ——培养结果滞后/阳性率低→肺炎 真菌感染：念珠菌属、曲霉菌为主 ——外周血或骨髓或无菌体液中可检出，病理学检查可作为直接依据 ——早期诊断困难→ 全身感染→真菌败血症 器官移植术后早期经验性抗感染治疗 各种感染的发生率高 临床表现无特异性，培养结果滞后，难以早期确诊 延误治疗常导致病死率增加 免疫抑制剂的血药浓度监测 环孢霉素 cyclosporin,CsA 他莫克斯 tacrolimus,FK506 霉酚酸酯，骁悉 mycophenolate mofetil,MMF 免疫抑制剂的特点 治疗窗口窄 药物强度大 药物毒性大不同患者的血药浓度有差异 个体差异大同一患者不同时期有差异 用药次数 合并用药情况 不同移植类型用药经验不同 不同检测方法的参考区间不同：高效液相色谱、毛细管电泳法、化学发光、放免、酶免、免疫荧光偏振等 常见器官移植的实验诊断 肾移植 ABO/Rh血型鉴定：同型相合的原则 CDC试验：阳性结果是移植禁忌 PRA检测：高PRA患者择期手术或治疗 HLA配型：美国器官分配网“点记分”方法， lowresolution ?HLA-A、B、DR三个座位上基因全配合记10点 ?B和DR无错配记7点 ?A和B无错配记6点 ?B或DR1个错配记3点 ?B+DR2个错配记2点 ?B+DR3个错配记1点 ——DR位点配合程