第2章 菌种及种制备.ppt.Convertor.docVIP

第二章 菌种及种子制备 目 录 第一节、菌种选育 第二节、菌种的衰退、复壮及保藏 第三节、国内外菌种保藏机构 第四节、种子制备 菌种选育的理论基础：微生物遗传学、分子遗传学 质粒（plasmid)：有时也称作核外基因，为非核染色体的共价闭环状DNA分子，具有自主复制功能，并带有某些特殊遗传性状的基因。质粒据其所具有的性状分为致育因子（F因子）、耐药因子（R因子）等 基因(gene)：一个含有特定的遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质最小功能单位，其物质基础是DNA或RNA 自然选育：利用微生物在一定条件下产生自发变异，通过分离、筛选，排除劣质性状的菌株，选择出维持原有生产水平或具有更优良生产性能的高产菌株，达到纯化与复壮菌种、保持稳定生产性能的目的。其主要原理是把微生物群体分离。 自然选育的方法与步骤： （1）通过表现形态淘汰不良菌株 （2）考察目的代谢产物产量 （3）进行遗传基因型纯度试验，考察菌种纯度 （4）传代稳定性试验：斜面传3-5代 诱变育种：指人为地、有意识地将对象生物置于诱变因子中，使该生物体发生突变，从这些突变体中筛选具有优良性状的突变株的过程（提高了菌种发生突变的频率和变异幅度，提高获优机率） 常用的诱变剂： 物理诱变因子：紫外线、X射线、快中子等 化学诱变因子：硫酸二乙酯（DES）、亚硝酸、吖啶橙 生物诱变因子：噬菌体、转座子等 影响诱变效果的因素： 外部环境条件：如温度、氧气、pH、水分 出发菌株的选择：生产菌株、野生菌株 合适的诱变剂量：大多采用70-80%或更低的致死剂量 出发菌株的生理状态：细菌-对数生长期；幼年孢子；营养体; 湿态敏感（106 个/mL孢子悬浮液或108个/mL的菌液） 诱变效应的测定：直接法和浓缩法，培养后测定菌株的目的代谢产物量 诱变方法：单因子、复合诱变 优良突变株的筛选方法：随机筛选或半理性化筛选 杂交育种：两个基因型不同的菌株通过接合使遗传重新组合，从中分离和筛选具有新性状的菌株。 原始亲本：用来杂交的野生型菌株，可以是不同谱系的，也可以是相同谱系但代数相差较多的，遗传基础差别要大，特性清楚，遗传标记明显。 直接亲本：直接用于配对的菌株，一般由原始亲本经诱变剂 处理得到，一般要做遗传标记，常用的标记有营养（用得较多）、形态、抗性、敏感性、产量、酶活等 杂交育种常用的几种培养基： 完全培养基：含有糖类、多种氨基酸、维生素及核酸碱基及无机盐等比较完全的营养基质，野生型、营养缺陷型菌株均可生长 基本培养基（要求严格）：只含纯的碳源、无机氮、无机盐类，不含有氨基酸、维生素及核酸碱基等有机营养物，只允许野生型菌株生长、营养缺陷型菌株不能生长 有限培养基：在基本培养基或蒸馏水中含有10-20%完全培养基成分的 补充培养基（鉴别培养基）：在基本培养基中加入已知成分的氨基酸、维生素及核酸碱基等 原生质体融合： 通过酶解作用将两个亲株的细胞壁去除，在高渗条件下释放出只有原生质膜 包被着的球状原生质体，然后将两个亲株的原生质体在高渗透条件下混合，加入融合促进剂或电融合等助融，使它们相互凝集，从而促使两套基因组之间的接触、交换、遗传重组，在适宜条件下使细胞壁再生，在再生细胞中获得重组体 原生质体融合的一般程序： （1）标记菌株的筛选：营养缺陷、抗药、某特征产物、菌落形态、培养特征等 （2）原生质体的制备：酶解去除两个亲株的细胞壁，细菌、放线菌采用溶菌酶（Lysozyme)，酵母菌用蜗牛酶，丝状真菌用蜗牛酶、纤维素酶（一般用复合酶） （3）原生质体的再生 （4）原生质体的融合 （5）融合子的选择：融合子的遗传分析 （6）优良菌株的筛选 基因工程技术： 又称遗传工程、DNA重组技术、基因克隆。指将某一生物体（供体）的遗传信息（基因）在细胞外与载体相连接（重组），构建成一个新的重组DNA分子，然后将其转入另一些生物体（受体）细胞中，使引入的供体DNA片段成为受体遗传物质的一部分，其所带的遗传信息得以表达或创建出一个新的物种，经改造过的菌称为“工程菌”。 基因克隆基本程序： 1）含目的基因DNA的制备 2）选择合适的载体 3）带有目的基因的DNA片段与载体连接 4）将重组的DNA分子转入受体细胞，在受体细胞内扩增 5）筛选出具有重组DNA分子的转化细胞 6）表达，鉴定外源基因的表达产物 由于微生物传代过程中不断产生变异，即遗传变异是绝对的，而稳定是相对的。菌株的优良性状不可能永久保持下去，即发生衰退（或退化）。这就需要通过创造适宜的环境来限制退化速度，并且要掌握如何让退化的菌种恢复其