液相色谱法与几种检测器程序.ppt

液相色谱法与几种检测器的学习 组员：李欢欢、戴雅吉、郭宣宣施香琴、马婷婷 * 内容介绍 液相色谱法的简单介绍 检测器的原理及应用范围 应用实例及发展 参考资料 * 液相色谱法： 简单的说就是用液体作为流动相的色谱法。 1903年俄国化学家M.C.茨维特首先将液相色谱法用于分离叶绿素。 * 液相色谱法的分离机制 液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。 * 根据固定相的不同， 液相色谱分为液固色谱、液液色谱和键合相色谱。应用最广的是以硅胶为填料的液固色谱和以微硅胶为基质的键合相色谱。 根据固定相的形式液相色谱法可以分为 柱色谱法、纸色谱法及 薄层色谱法。按吸附力可分为吸附 色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶渗透色谱。 * 常用的液相色谱仪 高效液相色谱仪由输出泵、进样装置、 色谱柱 、梯度冲洗装置、检测器及数据处理和微机 控制单元组成。 * 常见的几种检测器的原理及应用范围 检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号。 分类： A.选择性检测器：组分性质 1.紫外可见吸收检测器(UVD) 2.荧光检测器(FD)? B.通用型检测器：总体性质 3.蒸发光散射检测器（ELSD） 4.电化学检测器(ED) 5.示差折光检测器(RID) ? ??? * 检测器一 1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet－visibledetector，UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。 特点：灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。但是只能用于检测有紫外吸收的物质，且流动相的选择有一定限制，流动相的截止波长必须小于检测波长。 * 检测器二 荧光检测器(fluorescencedetector，FD)?荧光检测器是一种高灵敏度、有选择性的检测器，可检测能产生荧光的化合物。某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生成荧光衍生物，再进行荧光检测。 特点：其最小检测浓度可达0.1ng／ml，适用于痕量分析；一般情况下荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数量级，但其线性范围不如紫外. * 检测器三 ELSD是一种通用型检测器，定量依据为峰面积（峰高）或其比值的对数与进样量或浓度的对数成正比。 原理：首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 应用范围包括：碳水化合物，药物，脂类，甘油三脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂，营养滋补品，及组合分子库等。 * * * * * * 应用实例及发展 高效液相色谱荧光检测法检测鸡蛋中阿莫西林残留 鸡蛋经乙腈提取，饱和二氯甲烷萃取，水杨醛酸性条件下沸水浴衍生化后，以0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液(A)和乙腈溶液(B)为流动相，流速为1.0mL/min，荧光检测激发波长为354nm, 发射波长为445nm。阿莫西林在5.0～800ng/mL质量浓度范围内，本方法线性关系良好，相关系数为0.9997。 分析：所建立的方法简便、快速、灵敏度高，适用于鸡蛋中阿莫西林残留的高灵敏度检测。 * HPLC-UV-ELSD法同时测定青蒿中青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸的含量 用HPLC-UV-ELSD法同时测定青蒿药材中青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸的含量。采用NucleodurC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm ID);以乙腈-0.1%乙酸水(50∶50)为流动相;紫外检测波长209 nm,蒸发光散射检测器漂移管温度50℃。 分析：青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸能够达到很好分离。本法简单、准确、快速,可同时测定青蒿药材中青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸的含量。 * 进步与期待：如今更强调的是多种检测器联用来达到更好的分析分离效果，比如LC-MS,GC-MS,GC-LC等等。希望我们能在学习的基础上有更好的创新，学以致用。 * 参考资料 1、中药制剂分析第二版蔡宝昌 2、谢恺丹,陈学森,徐东等.高效液相色谱荧光检测法检测鸡蛋中阿莫西林残留[J]. 食品科学, 2012, 33(22): 264-268. 3、张东,杨岚,杨立新等.HPLC-UV-ELSD法同时测定青蒿中青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸的含量[J].药学学报2007,42(9):978 -981. * * *