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第四章 紫外-可见光分光光度法 4.1 概述 分光光度分析法是以物质对光的选择性吸收为基础的分析方法。根据物质所吸收光的波长范围不同,分光光度分析法又有紫外、可见及红外分光光度法。 4.1.1 方法的特点 1. 灵敏度高 通常,待测物质的含量1~10-5%时,能够用分光光度法准确测定。所以它主要用于测定微量组分。 2. 应用广泛 几乎所有的无机离子和许多有机化合物可以用分光光度法进行测定。如土壤中的氮、磷以及植物灰、动物体液中各种微量元素的测定。 3. 操作简便、迅速、仪器设备不太复杂 若采用灵敏度高、选择性好的有机显色剂,并加入适当的掩蔽剂,一般不经过分离即可直接进行分光光度法测定、其方法的相对误差通常为5~10%,其准确度虽不及重量分析法和容量法,但对于微量组分的测定,结果还是满意的。 4.2.2 光的基本性质 4.2.3 溶液颜色与光吸收的关系 光波是一种电磁波。电磁波包括无线电波、微波、红外光、可见光、紫外光、x射线等。如果按照其频率或波长的大小排列,可见光只是电磁波中一个很小的波段。见表12-1 有色物质的不同颜色是由于吸收了不同波长的光所致。溶液能选择性地吸收某些波长的光,而让其他波长的光透过,这时溶液呈现出透过光的颜色。透过光的颜色是溶液吸收光的互补色。有色溶液对各种波长的光的吸收情况,常用光吸收曲线来描述。将不同波长的单色光依次通过一定的有色溶液,分别测出对各种波长的光的吸收程度(用字母A表示)。以波长为横坐标,吸光程度为纵坐标作图,所得的曲线称为吸收曲线或吸收光谱曲线。 4.3 光吸收基本定律 当一束平行的单色光照射均匀的有色溶液时,光的一部分被吸收,一部分透过溶液,一部分被比色皿的表面反射。如果入射光的强度为I0,吸收光的强度为Ia,透过光的强度为It,反射光的强度为Ir,则: I0=Ia + It + Ir 在吸光光度法中,由于采用同样质料的比色皿进行测量,反射光的强度基本上相同,其影响可以相互抵消,上式可简化为: I0=Ia + It 透过光的强度It与入射光的强度Io之比称为透光度或透光率,用T表示。 T= It/Io 一束单色光通过溶液后,由于溶液吸收了一部分光能,光的强度就要减弱。若溶液的浓度不变,液层越厚,透过光的强度越小,光线减弱的程度越大。 如果将液层分成许多无限小的相等的薄层,其厚度为db。则dI应与db及I成正比,即-dI ∝ Idb,从而,-dI/I=k1db,积分此式,得: 将上式变成常用对数,得 例1. 有一单色光通过厚度为1cm的有色溶液,其强度减弱20%。若通过5cm厚度的相同溶液,其强度减弱百分之几? 解: lgT1 c1 ───── = ───, lgT2 5c1 lgT2 = 5lgT1= 5×lg0.80 = - 0.485 T2= 32.7% , 即减弱67.3% 当一束单色光通过液层厚度一定的溶液时,溶液的浓度愈大,光线强度减弱愈显著。若有色溶液的浓度增加dc,入射光通过溶液后,强度的减弱-dI与人射光强度I及dc成正比, 即-dI=k3Idc,或 -dI/I=k3dc,积分,可得到: 例2. 一符合比尔定律的有色溶液,当浓度为c时,透射比为T,若其它条件不变,浓度为c/3时,T为_________,浓度为2c时,T为__________。 解: T1/3 T2 这说明浓度与透射比T 的是指数关系。 3.朗伯一比耳定律 如果溶液浓度和液层厚度都是可变的,就要同时考虑溶液浓度c和液层厚度b对吸光度的影响。为此,将朗伯和比耳公式和合并,得到 4.吸光系数、摩尔吸光系数 在朗伯-比耳公式,k值决定于c,b所用的单位,它与入射光的波长及溶液的性质有关。当浓度c以g·L-1、液层厚度b以cm表示时,常数k是以a表示,此时称为吸光系数,单位为L·g-1·cm-1。朗伯-比耳公式可表示为: A=abc 若b以 cm为单位,c以 mol·L-1为单位时,则将k称为摩尔吸光系数,以符号ε表示,其单位为L·mol-1c
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