感受态细胞制备及各种感受态的特点.docVIP

感受态细胞制备 制备感受态常用的方法是电击法和CaCl2制备法，以下介绍CaCl2制备法： 1、可以从-80℃冰柜中，取出一支冻存菌株，于事先照过紫外的超净台中，用无菌的接种环轻轻蘸取菌种后，在无抗平板（由于Rocetta含有氯霉素抗性，需要涂布在氯霉素抗性的平板）上划线，并将菌种迅速放回-80℃保存在划线板上做好相应标记，于37℃培养。℃培养过夜的新鲜平板上挑取一个单克隆，接种于2mlEP管中，37℃，220rpm震荡培养约6个小时至对数生长中后期；将该菌悬液以1:100的比例接种于50ml LB液体培养基中,37℃振荡培养2.5小时至OD600 0.5在无菌条件下将细菌转移到一个无菌、预冷的离心管中，在冰上放置5~10min4℃ 5000g离心5分钟。用预冷的去离子水洗涤沉淀，4℃ 5000g离心5分钟； 5、沉淀加入2ml预冷的0.05mol/L CaCl2-15%甘油混合溶液，轻吹散，冰浴5分钟，4℃5000g离心5分钟； 沉淀加入2ml预冷的0.05mol/L CaCl2-15%甘油混合溶液，轻吹散，即成为感受态细胞悬液。分装成50~100μl的小份，贮存于-70℃可保存半年 含15%甘油的0.05mol/L CaCl2制备方法: 称取0.28g CaCl2 无水,分析纯 ,溶于50ml重蒸水中,加入15ml甘油,定容至100ml,高压灭菌。 感受态细胞的特征 感受态：细