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现代药理学研究方法作业 座机电话号码59 药学1101班 邵鑫 1、简述常用的检测凋亡的药理学研究方法？ （1）双重荧光素染色 细胞发生凋亡时,胞膜的通透性增加,但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。根据这一特点,可采用荧光素染色、流式细胞仪检测来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。YOPRO-1 YP 是一种膜不通透型DNA交联荧光染料。在细胞凋亡的早期,当细胞膜通透性发生微小变化时,YP可进入细胞核而与DNA结合,产生绿色荧光。碘化丙啶 PI 是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但能够透过凋亡中、晚期的细胞和死细胞的细胞膜而使细胞核染色。应用YP与PI联合染色可将细胞区分为正常细胞 YP-/PI- 、早期凋亡细胞 YP+/PI- 、中晚期凋亡细胞和坏死细胞 YP/PI 。 （2） DNA断裂 当细胞凋亡或坏死时,核内DNA均发生断裂,高分子量DNA减少,小分子量DNA片段增多并且出现在胞质内。但凋亡细胞DNA断裂点有规律地发生在核小体之间,出现长度为180~200bp的DNA片段,电泳时呈现阶梯状条带;而坏死细胞的DNA断裂点无规律性,产生的杂乱片段在电泳时呈现模糊的连续性条带。利用此特征可以确定群体细胞的凋亡,并可与坏死细胞相区别。 （3）原位末端检测技术 此技术是指将细胞 或组织 固定后,应用标记的脱氧尿苷三磷酸 dUTP 在原位检测DNA裂解点的技术。DNA片段原