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  • 2016-10-20 发布于重庆
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生物技术综合实验论文

绿色荧光蛋白基因在大肠杆菌里的克隆与表达 摘 要:研究绿色荧光蛋白( Fluorescent Protein,FP)基因在大肠杆菌中表达。通过分别将DH-5(pEGFP-N3),DH-5α(pET-28a)提取质粒、酶切并连接形成重组质粒pET-28a-FP,将重组质粒E.coli DH-5α感受态细胞中进行转化,通过限制性核酸内切酶Not I与Bam H和PCR对所建质粒进行分析鉴定后, 通过转化的方法把含色荧光蛋(GFP)外源基因转入大肠杆菌体内进行表达,用IPTG诱导FP基因表达,可以看到显现色,判断FP基因在大肠杆菌中成功表达结果显示构建的重组质粒pET-28-GFP在E.coli中成功表达(green fluorescent protein, GFP)。绿色荧光蛋白是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。当受到紫外或蓝光激发时,GFP 发射绿色荧光。近年来,随着GFP在各种异源细胞,如细菌、昆虫及植物细胞中的表达,GFP作为一种新型的报告物在生物学界引起 了广泛的关注关于它的基本结构、生色团、发光机理及基因的改造均有大量的研究报道。( green fluorescent p rotein, GFP)是238 个氨基酸组成的单体蛋白,其分子量为27 kDa。GFP 作为一种新的报告基因,与以往lacZ、CAT GFP 不具有种属依赖性,在多种原核

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