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基于对海栖热孢菌来源的α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的结构分析揭示其热稳定性和底物特异性特征 从海栖热孢菌MSB8中提取的α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(TmAFase)是一种高耐热性半纤维素外切酶,与其他51糖苷水解酶家族的酶相比较，作用于阿拉伯糖和木聚糖时显示出了相对较高的活性。在目前的研究中，我们完成了关于阿拉伯糖苷酶的酶动力学特性和结构分析的工作。在海栖热孢菌就来源的阿拉伯呋喃糖苷酶（TmAFase）中发现的紧密领域协同作用,比如在每一个单体上的一个域间二硫键(Cys306和Cys476),在二聚物的界面上的一个新的延伸臂(氨基酸374-385),和六聚体上的所有12个盐桥,应该是酶的热稳定性的原因。木聚糖聚合力的决定因素之一(Trp96)被确认是在活性部位,一定范围的氨基酸(374 - 385)突出隆起在底物结合位点生成一个凹点并形成一个明显的墙层来。蚀变性的小洞形状，带有一个强大的负静电分布，可能与海栖热孢菌就来源的阿拉伯呋喃糖苷酶（TmAFase）的支化聚合物基质与独特的结构衬底有关。 关键词：海栖热孢菌 阿拉伯糖苷酶 结构分析 X-衍射结晶学 半纤维素是由各种戊糖糖、己糖糖,糖和酸组成的最丰富、可再生多相聚合物之一。最近,研究人员正高度关注在半纤维素等各种可发酵糖的高效分解，生物燃料和化学品的生产方面。由于半纤维素生物质在结构上极高的复杂性和可变性,因而,几个半纤维素酶的协同作用主要包括裂解开链外切-β-(1,4)木聚糖酶和β-xylosidases和侧面消除开链辅助酶,对这些生物质材料的完全降解至关重要。α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(AFase; E.C. 3.2.1.55)是最重要的辅助酶,这种酶可以催化水解的终端那些非还原性的α-L -(1、2),α-L -(1,3),和α-L -(1、5)-arabinofuranosyl 残留物来源于arabinose-containing多糖,如阿拉伯多糖和阿糖基木聚糖。当作用于高分子聚合物时，这些酶与半纤维素酶结合可以协同性加快糖苷键的水解作用。 阿拉伯呋喃糖苷酶(AFase)主要属于糖苷水解酶(GH)家族51和54[1,6]。在过去的几十年，AFases重要组成部分的结构功能关系已经在许多研究中得出了。自从H?vel et al.[8]从嗜热脂肪土芽孢杆菌T-6中确定阿拉伯呋喃糖苷酶（AFase）的三维结构，微生物来源的AFases结构已经在梭状芽胞杆菌thermocellum ATCC 27405 [22]和热杆菌属木聚糖的研究中被报道过了。 在目前的研究中,我们使用固定大肠杆菌表达的重组海栖热孢菌就来源的阿拉伯呋喃糖苷酶（TmAFase）并确定其三维结构。后来，这个结构被用于与其他GH-51家族酶相比较，以更好地了解其在功能方面的高耐热性和独特的底物特异性。 材料和方法 基因表达与酶纯化 酶活性测定 结晶和数据收集 结构测定与数据收集 结果与讨论 阿拉伯糖苷酶的酶特征 在此之前，我们从海栖热孢菌MSB8和杆菌属KCTC 3012中克隆了海栖热孢菌就来源的阿拉伯呋喃糖苷酶（TmAFase）和阿拉伯木聚糖苷酶（GAFase）α-L-(1,2)-，α-L-(1,3)-和α-L-(1,5)（GAFase）（β/α）8