2012年10月27日组会报告(正式版)绪论.pptVIP

* 2012.10.27 Routine Briefing Lrp6蛋白具备能够扭转PGE2 通过DNA甲基化途径促进肿瘤生长 的能力的研究计划 Introduction experiments in vitro experiments in vivo the future Nat Med. Author manuscript available in PMC 2012 August 01 the story about the paper PGE2能够通过其受体EP4作用于细胞内，增强了细胞内抑癌基因如CDKN2B、CNR1和DNA修复基因如MLH1、MGMT的启动子区域CGI的甲基化，导致了DNA甲基转移酶诸如DNMT1及DNMT3B的表达水平的增高，从而抑制这些基因的表达，最终促进了结直肠肿瘤的生长。 PEG2——前列腺素2 前列腺素家族的类型之一（前列腺素依据分子结构的不同分为若干类型）；目前已知至少有四种GPCR,即EP1、EP2、EP3和EP4,介导了PGE2的生物学功能。 PTGS2——前列腺内过氧化酶2 COX-2（环氧合酶2）——是PGE2的介导物质；当身体组织受到某种刺激如外伤、感染等会活化环氧合酶，能够使花生四烯酸（Arachidonic acid）大量转变为PGE2等前列腺素。 tumor suppressor CDKN2B——Cyclin-dependent kinase 4 inhibitor B CNR1——cannabinoid receptor type 1 DNA repair gene MLH1——MutL homolog 1, colon cancer, nonpolyposis type 2 MGMT——Methylated-DNA-protein-cysteine methyltransferase CpG island C G富集区——通常这些位点很容易发生甲基化 在人类基因组内，GC的含量大约为40%；这些GC并不是平均分布在基因组内，在某些DNA片段上其含量可高达60%以上，而在另一些区域则只有33%左右。这种GC含量的差别，在基因表达的调控和基因突变上都可能扮演着重要的角色。 在基因的末端和启动子区域通常存在一些富含双核苷酸“CG”的区域，称为“CpG岛”，这些CpG岛不仅是基因的一种标志，而且还参与基因表达的调控和影响染色质的结构。 正常细胞的CpG岛由于被保护而处于非甲基化状态。全基因组低甲基化，维持甲基化模式酶的调节失控和正常非甲基化CpG岛的高甲基化是人类肿瘤中普遍存在的现象。以往的研究证明启动子区的高甲基化导致抑癌基因失活是人类肿瘤所具有的共同特征之一，而且这种高甲基化是导致抑癌基因失活的机制。 概念：DNA甲基化是DNA化学修饰的一种形式；即在甲基转移酶的催化下，DNA的CpG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形成5－甲基胞嘧啶。 作用：DNA甲基化可使基因沉默化，进而使其失去功能。 DNA甲基化可引起基因组中相应区域染色质结构变化，使DNA失去核酶限制性内切酶的切割位点，以及DNA 酶的敏感位点，使染色质高度螺旋化，凝缩成团，从而失去转录活性。 DNA Methylation DNA methyltransferase DNA 甲基转移酶分类 DNM T1——持续性DNA甲基转移酶 作用于仅有一条链甲基化的DNA 双链，使其完全甲基化 DNM T3a、DNM T3b——从头甲基转移酶 它们可甲基化CpG岛，使其半甲基化，继而在DNM T1的作用下全甲基化。从头甲基转移酶可能参与细胞生长分化调控，其中DNM T3b在肿瘤基因甲基化中起重要作用。 甲·首先看加入Lrp6之后，是否能够reverse PGE2上调DNMT1和DNMT3B的能力；即Lrp6 reverse了PGE2引起细胞内DNA甲基化现象的发生。 由于之前的经验，觉得在第一步可以不急于深入，能够在蛋白水平上，通过western blot的方法观察到现象即可。接下来当发现Lrp6能够reverse PGE2上调DNMT1和DNMT3B的时，再去从更多角度加以验证。 甲·1·首先重复文中的实验，看PGE2是否能够引起细胞中DNA甲基化现象的发生，即观察得到PGE2是否能够引起DNMT1和DNMT3B的上调。 甲·2·其次看加入Lrp6之后，是否能够reverse PGE2上调DNMT1和DNMT3B的能力。 乙·找出Lrp6蛋白究竟是和哪一个PGE2受体（EP1、EP2、EP3、EP4）发生结合时导致了Lrp6蛋白具有reverse PGE2引起细胞内DNA甲基化现象的能力。 即分别在使用PGE2的4种受体拮抗剂时，看加入Lrp6