细菌革兰氏染色幻灯片.pptVIP

细菌革兰氏染色法 巴州质检所 阿依尼萨.艾依提 革 兰 氏 染 色 革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。革兰氏染色是细菌学上最常用的鉴别染色法。 实验材料 实验原理 革兰氏染液 简 单 染 色 法 * * 微生物中细菌是很小的生物体，无色透明，未经染色往往不易被识别，因此只有借助于染色法可使细菌着色，与背景形成鲜明对比，才容易在显微镜下观察。并且还可以通过染色的方法鉴别革兰氏染色特性. 活材料：培养18-24h的大肠杆菌 染色液和试剂：结晶紫、卢哥氏碘液、95%酒精、复红、二甲苯、香柏油。 器材：无菌水、废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。 革兰氏阳性菌细胞壁结构图 革兰氏染色阳性细菌肽聚糖层厚，含量多，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色，复染后不着色，不留结晶紫的颜色； 实验原理 革兰氏阴性菌细胞壁结构图 而革兰氏染色阴性细菌肽聚糖层很薄，含量少，脂肪含量高，经乙醇处理后部分细胞壁脂类可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径变大或通透性增加，不能阻止溶剂透入，酒精将结晶紫与碘的复合物洗脱，细菌被脱色，经复染后染成红色， 实验原理 所有本实验的成败关键是酒精脱色，脱色不够将革兰氏染色阴性转变为革兰氏染色阳性，脱色过度将革兰氏染色阳性变成革兰氏染色阴性。其次涂片要均匀、薄；再者菌龄也可影响染色性，菌龄老，陈旧的细菌培养物，往往G+转变成G-，一般做革兰氏染色用18小时左右的细菌培养物，不要超过24小时，以免影响染色性。 1、碱性染料 （美蓝、碱性复红、结晶紫 ） 2、媒染剂 （碘液 ） 3、脱色剂 （95%的乙醇） 4、复染液 （复红溶液、番红溶液、沙黄溶液） 染色程序 干燥 固定 结晶紫染色 大肠 金葡 涂片: 液体培养基、固体培养基 干燥：自然干燥。 固定：酒精灯下固定3-4次。 （杀死细菌、粘附、改变通透性） 初染：结晶紫染色1分钟。 染色程序 水洗：无菌水轻洗。 水洗 碘液媒染 水洗 95%酒精脱色 媒染：碘液媒染1分钟。 水洗：无菌水轻洗。 脱色：95%酒精脱色。 复红复染 水洗 镜检 G– 杆菌 G+ 球菌 染色程序 复染：复红染色30秒。 镜检：红色—G- 杆菌 紫色—G+球菌 水洗：无菌水轻洗。 水洗 水洗：无菌水轻洗。 结果判断 红色为革兰氏阴性菌 大肠埃希氏菌 结果判断 紫色为革兰氏阳性菌 金黄色葡萄球菌 注意事项 1．标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。 3．玻片通过火焰温度不能太高。 2．若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不在出现紫色为止。