准备二淀粉酶的摇瓶发酵.doc

实验二、?淀粉酶的摇瓶发酵 地点：A510-A517 时间：第十周 周一（4.16）14：20---18：00 周二（4.17）14：20---18：00 周三（4.18）14：20---18：00 周四（4.19）14：20---18：00 共4次，每次所需用品如下： 菌种： 枯草芽胞杆菌 固体淀粉培养基活化，检测是否产淀粉酶 抓紧提前准备 A510房间： 种子培养基： 50 mL 18 h LB枯草芽胞杆菌液体培养基 3瓶 1 mL的取液器、1 mL的无菌枪盒（含枪头）、酒精灯、打火机各2样 药品：葡萄糖，玉米淀粉，酵母膏，蛋白胨，氯化铵，硫酸镁，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠， 1mol/L NaOH , 1mol/L HCl，各6小瓶； 仪器材料：天平，钥匙，广泛pH试纸，玻璃棒，不锈钢烧杯各6样； 250 mL的三角瓶26个（每个含8层纱布，报纸和棉线） 白纸若干（称量用） 电炉、电磁炉、空置摇床各2台 517房间：（分3组摆放） 比色皿3个（用小烧杯盛放与分光光度计旁） 25 mL的带塞比色管8只×6（组） 试管架、漏斗、1 mL移液管、5 mL移液管、洗瓶（蒸馏水）各6样 废液瓶（乘药品的塑料剪口敞开）3个 小号的滤纸1盒 电炉、不锈钢烧杯、水浴锅各1个（放分光光度计对面的实验台） 300 mL pH6.0的磷酸缓冲液、50 mL葡萄糖标准液（1mg/ml1000 mL 部分溶液的配置方法 （DNS 溶液的配置：　将6.3克DNS和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml，即制成3,5-二硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶中备用。原碘液：称取碘11 g、碘化钾22 g，用少量水使碘完全溶解，然后定容至500 mL，贮于棕色瓶中。 稀碘液：吸取原碘液2.00 mL，加碘化钾20 g用水溶解并定容至500 mL，贮于棕色瓶中。 20 g/L可溶性淀粉溶液：称取可溶性淀粉（以绝干计）2.00 g，精确至0.001 g，用水调成浆状物，搅动下缓缓倾入70 mL沸水中，然后以30 mL水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并入其中，加热至完全透明，冷却，定容至100 mL，此溶液需要当天配制。 磷酸缓冲液（pH 6.0）：称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）45.23 g、柠檬酸C6H8O7·H2O）8.07g，用水溶解并定容至100mL，配好后用pH计校正。