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三聚氰胺的检测方法探讨 　　【摘要】“毒奶粉”引起国内外的高度关注，三聚氰胺普遍存在于人们生产生活当中，加强对三聚氰胺的控制，研究三聚氰胺检测方法尤为重要。本文阐述了五种三聚氰胺的检测方法，作了优缺点比较分析，对未来的研究方向进行了简要分析。 　　【关键词】三聚氰胺；检测方法；研究 　　【分类号】：F407.44 　　2008年9月，三鹿“毒奶粉”事件导致全国许多婴儿患上肾结石，甚至发生死亡，引起国内外的高度关注。研究临床发现，三聚氰胺可能会在人体泌尿系统如膀胱和肾脏形成泥沙样结晶或结石。实际上，三聚氰胺是一种有机化工中间产物，广泛用于塑料、涂料、粘合剂等化工原料和农药化肥的原料，同时也是食品包装材料的原料。特别是儿童喜爱的鲜艳仿瓷餐具，也叫密胺餐具，如果使用了劣质产品，原材料树脂聚合的不好，就会残留三聚氰胺，与食品接触中难免会有三聚氰胺迁移出来。准确检验样品中三聚氰胺真实含量，禁止人为添加三聚氰胺，严格把关产品质量，控制三聚氰胺限量值可最大限度保护人体健康。 　　一. 三聚氰胺检测方法 　　三聚氰胺普遍存在，加强对三聚氰胺的控制，研究三聚氰胺检测方法尤为重要。我国严控三聚氰胺临时限量值，即婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺的限量值为1毫克/千克，液态奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5毫克/千克，GB9690-2009对食品容器、包装材料用三聚氰胺-甲醛成型品规定三聚氰胺的迁移限量为0.2mg/dm2。当前乳与乳制品三聚氰胺检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱―质谱法（GC-MS）和液相色谱―质谱/质谱法（LC―MS/MS），其定量限分别为2mg/kg，0.05mg/kg和0.01mg/kg。 　　1. 高效液相色谱法（HPLC） 　　试样奶或奶制品采用三氯乙酸溶液-乙腈或三氯乙酸溶液-甲醇超声振荡提取，离心沉淀蛋白质，三氯乙酸上清液过滤后经阳离子交换固相萃取柱净化，用高效液相色谱在紫外波长240nm处测定，外标法定量，结果准确。常用色谱柱为C18和C8柱。三聚氰胺为强极性化合物，在传统的反相色谱中无保留能力，需向流动相中加入离子对试剂与三聚氰胺成弱极性物质达到分离效果。流动相以柠檬酸为缓冲溶液，加入庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、己烷磺酸钠离子对试剂和乙腈以一定比例混合。食品模拟液中三聚氰胺检测参考GB/T 23296.15-2009《食品接触材料 高分子材料 食品模拟物中2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪（三聚氰胺）的测定 高效液相色谱法》，模拟液中不含有蛋白质，无需沉淀，其中的三聚氰胺通过高效液相色谱直接进行分离，流动相为磷酸二氢钠缓冲溶液与乙腈。水基食品模拟物如水、10%乙醇、3%乙酸直接进样，橄榄油通过水―异丙醇溶液萃取后进样，在紫外波长230nm处测定，外标法定量。 　　2. 液相色谱―质谱/质谱法（LC-MS/MS） 　　液相色谱―质谱/质谱法的样品处理大致同高效液相色谱法，但却有较低的检出限。色谱柱为阳离子交换与反相C18混合填料柱，用乙酸铵溶液和乙腈混合流动相，电喷雾电离，多反应监测扫描模式，母离子m/z为127，定量子离子m/z为85，定性子离子m/z为68。使用串联质谱作为监测器，大大提高了灵敏度以及抗干扰能力，降低检出限和定量限，结果准确可靠。同时不使用离子对试剂减小了对色谱柱的腐蚀，延长柱子的寿命。然而液相色谱―质谱/质谱仪价格比较昂贵，只有部分实验室使用，普及性不大。 　　3. 气相色谱―质谱法（GC-MS） 　　与高效液相色谱法比较，气相色谱质谱法重现性好，灵敏度强，准确度高，检出限低。提取液同为三氯乙酸，采用22g/L浓度的乙酸铅沉淀蛋白质，上清液离心过滤后过阳离子交换固相萃取柱净化。由于三聚氰胺性质稳定，熔点高，难气化，所以经提取净化后的三聚氰胺溶液需氮气吹干后进行硅烷化衍生再由气相色谱质谱仪测定。GB/T 22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》采用N，O-双三甲基硅基三氟乙酰胺+三甲基氯硅烷作为硅烷化试剂。MS的扫描定性离子m/z为99、171、327、342，定量离子m/z为327。GC-MS法更适合食品中微量三聚氰胺的检测。 　　4. 酶标免疫吸附法 　　酶标法的基本原理使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。这种方法使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留了其免疫活性，又保留了酶的活性。酶标免疫吸附法是一种快速检测三聚氰胺的方法，其原理是试样中三聚氰胺、酶标三聚氰胺抗原与包被于微量反应板中的三聚氰胺抗体进行免疫竞争反应，加入酶底物反应后显色，试样中三聚氰胺含量与颜色深度成正比，用目测法与三聚氰胺标准系列溶液进行半定量检测，用酶标测定仪进行定量检测。试样用萃取液提取，与