分子生物学：翻译-精简版解决方案.ppt

第四章 生物信息的传递（下） ——从RNA到蛋白质 一、遗传密码和翻译系统 （一） 遗传密码的破译 1954年G.Gamov对破译密码首先提出了设想 若一种碱基对应与一种氨基酸，那么只可能产生4种氨基酸; 若2个碱基编码一种氨基酸的话，4种碱基共有42=16种不同的排列组合; 3个碱基编码一种氨基酸，经排列组合可产生43=64种不同形式 若是四联密码，就会产生44=256种排列组合 三联密码的证实 （1） 1961年Crick和Brenner.S等证实了三联密码的真实性。 他们用T4染色体上的一个基因（rⅡ位点）通过用原黄素（proflavin）处理，可以使DNA脱落或插入单个碱基，插入叫“加字”突变，脱落叫“减字”突变.无论加字和减字都可以引起移码突变。 Crick小组用这种方法获得一系列的T4“加字”和“减字”突变，再进行杂交来获得加入或减少一个，二个，三个的不同碱基数的系列突变。 通过这样的方法他们发现加入或减少一个和二个碱基都会引起移码突变，而加入或减少3个碱基时反而可以恢复正确的读框，表明每个密码子的确是由3个碱基组成的。 在这篇文章中Crick对遗传密码提出了4个特点： 3个碱基一组，编码一个氨基酸 密码是不重叠的； 碱基的顺序从固定起点解读,即mRNA具有固定的阅读框； 密码子是简并（degeneracy）的,即某个特定的氨基酸可以由几个密码子来编码。 三联密码的证实 （2） —— 利用突变来解读密码 1960，A. Tsugita，H. Fraenkel-Connrat小组和H.G. Wittmann小组试图通过用亚硝酸来对TMV进行诱变。 当时根据亚硝酸诱变的原理，mRNA中的A→G或C→U。 当时已搞清了TMV肽链的一级结构由159个氨基酸组成 将突变型和野生型进行比较就能确定肽链上氨基酸取代的位点和类型。 他们一共获得了约200个突变株，经反复比较分析结果破释了少数几个密码子，但他们直接地证实了密码子是不重叠的。若当时可以测序的话，用这一方法是可以破译所有的密码子。 三联密码的证实 （3） ——无细胞系统的建立 1955 S. Ocha在细菌中分离了多核苷酸磷酸化酶（polynucleotide phosphorylase）,它催化核糖核苷二磷酸的聚合，它不需要任何DNA模板就可合成. 1961年Nirenberg在多核苷酸磷酸化酶发现的基础上建立了无细胞系统。 具体方法是: 去模板：用DNAase处理E.coli抽提物，使DNA降解，除去原有的细菌模板。 加入pol U：合成了多聚苯丙氨酸， 这一结果不仅证实了无细胞系统的成功，同时还表明UUU是苯丙氨酸的密码子。 分别加入polyA，polyC 和polyG 结果相应地获得了多聚赖氨酸，多聚脯氨酸和多聚甘氨酸。 由于当时还未分离RNA pol酶，无法按设计的模板来合成RNA，Nirenberg又想出了一种新的方法，就是按一定的碱基比例来合成RNA。 按比例加入２种核苷混合的多聚物 比如在底物中加5份的UDP和1份的GDP，碱基比为U：G＝5：1， 它们能组成8种三联体： UUU，UUG，UGU，GUU， GGG，GGU，GUG，UGG。 U和G将随机地加入到三联体中，这样按比例各个位子上进入U和G 的概率不同，如氨基酸测定结果： UUU：UGG＝（5?5?5）:（5?1?1）＝ 25 :1 同理UUU：UUG ＝5:1， 根据检测结果推测: 苯丙氨酸（UUU）：半胱氨酸（UGU）＝5:1 苯丙氨酸（UUU）：缬氨酸（GUU）＝5:1 苯丙氨酸（UUU）：甘氨酸（GGU）＝25:1 苯丙氨酸的密码子是已知的，由3个U组成那么: 半胱氨酸一定是由2个U，1个G组成； 缬氨酸同样如此； 甘氨酸应是由一个U两个G组成。 Ochoa,S.及其合作者也采用该方法，两组展开了激烈的竞争，经过两个组一年多的努力，结果搞清了各种氨基酸的碱基组成。但是并不知其顺序。 Nirenberg于1964年又采用三联体结合实验，一举破译了所有密码，取得了重大的突破。 三联密码的证实 （4） ——三联体结合实验 1964年Nirenberg又采用三联体结合实验，这个方法的思路是建立在两项基础上的： tRNA和氨基酸及三联体的结合是特异的； 上述结合的复合体大分子是不能通过硝酸纤维滤膜的微孔，而tRNA-氨基酸的复合体是可以通过的。 三联密码的证实 （5） ——利用重复共聚物 Khorara 采用了有机合成一条短的单链DNA重