DNA复制—1.pptVIP

医学分子生物学第三章 基因组复制 真核DNA复制所需要的蛋白因子 * * 1. 论述参与原核生物DNA复制过程所需的物质及其作用。 改变DNA的拓扑性质，解除其对复制的空间组阻碍 拓扑异构酶 特异结合单链DNA，稳定复制说要求的单链结构 单链DNA结合蛋白 催化冈崎片段间的缺口连接 DNA连接酶 作为复制原料 4种脱氧核糖核苷酸 催化DNA链的合成 DNA聚合酶 启动RNA引物的合成 引发体 （引发前体+引物酶） 解开DNA双链 DNA解螺旋酶 作为复制模板 亲代DNA 作用 物质名称 2. 论述参与真核生物DNA复制过程所需的物质及其作用。 切除冈崎片段上保留的一个核糖核苷酸 核酸内切酶 FEN1 切除RNA引物，但在冈崎片段上保留一个核糖核苷酸 核酸酶 RNaseH1 维持DAN局部单恋结构 单链DNA结合蛋白 RFA 负责将PCNA 套在DAN上 RFC 沿DAN滑动。使聚合酶δ不会从DNA上滑落 DAN聚合酶δ的辅助蛋白 PCNA 作用 活性 名称 3. DNA复制为什么可将遗传信息准确无误地传递至后代？ DNA聚合酶识别模板并选择正确的dNTP。 DNA聚合酶具有3到5外切酶活性的校正作用，可以提高复制的保真性。DNA聚合酶III的复杂亚基结构（由10种亚基组成）使其具有更高的忠实性、协同性和持续性，如无校对功能，复制出错率仅为7*10E-6，具有校对功能后降低至5*10E-9。另外，DNA聚合酶I在DNA复制中起着切除、修复错误复制的核苷对的作用，DNA聚合酶II也在复制中起修复复制错误的能力。 综上所述，所以DNA的复制有着高度的保真性,可将遗传信息准确无误地传递至后代。 4. 为什么DNA复制需要引物？ DNA聚合酶工作时必须要有一个引物，它只能把新的核苷酸加到已经存在的核酸的3-羟基上，RNA引物就提供这个羟基。 DNA的复制需要RNA引物，这是由DNA聚合酶和RNA聚合酶的特性决定的。DNA聚合酶不能从头合成DNA（需要引物DNA or RNA），因为DNA聚合酶具有高保真系统，这个系统要求，在新链的延伸过程中，只有新添加的碱基与模板链形成双螺旋才能继续链的延伸，否则延伸终止，启动切除修复机制，直至添加正确的碱基，也即是在DNA聚合酶的上游位置一定要互补形成双链（可以是RNA-DNA）才能继续下游DNA的合成，这是它的忠实性和高保真系统决定的。而RNA聚合酶可以从头合成RNA，合成的RNA游离在模板外，不需要与模板形成互补配对的双螺旋结构就能继续下游的合成。两种酶的不同机制决定了DNA复制时用的只能是RNA引物。 5. 在DNA复制过程中DNA双螺旋链是怎样形成复制叉的？ 复制开始时，DNA解旋酶把DNA双链分子解开成两股单链，形成了Y形的复制叉。复制叉是不对称的，即一条子链是连续合成的，这是前导链，其合成稍稍领先于另一条不连续合成的后随链。 由于DNA子链的合成是从5端到3端方向进行的，所以前导链只需在复制起点上有一个引物，一旦形成复制叉后，DNA聚合酶就可沿着亲链模板不断地加上新的核苷酸，从而合成一条新的连续的子链。同样道理，由于DNA子链的合成是从5端到3端方向进行，所以一定要等前导链开始合成而将后随链的合成模板暴露出来以后，后随链的合成才得以进行。此时，先由DNA引物酶合成与后随链亲链的碱基互补的、长约10个核苷酸的RNA引物，在DNA聚合酶作用下沿着后随链模板合成DNA，一直延伸到前一个DNA片段5端上RNA引物为止。这样合成的是一系列不连续的长约200个核苷酸的片段，这被称为冈崎片段 okazaki fragment 。专一识别DNA／RNA双链体中的RNA链的DNA修复酶，切除RNA引物，代之以由DNA聚合酶合成的DNA小片段。最后由DNA连接酶把冈崎片段连接成一条连续的DNA单链。 5. 在DNA复制过程中DNA双螺旋链是怎样形成复制叉的？ 复制叉及半不连续复制示意图 6. 为什么称DNA复制过程为半保留复制？ 也称为半不连续复制？其含义是什么？ DNA复制时，亲代DNA双链解离为两条单链，各自作为模板，按碱基互补原则合成新的互补链，新合成的两个DNA分子和亲代的DNA分子是完全一样的。在子代的双链DNA分子中一条单链来自亲代，另一条单链则是新合成的。 ————半保留复制 随着复制叉的推进，两条新链的合成方向是不同的： 一条链延伸的方向与复制叉前进的方向一致，它的合成能连续进行，称为先导链（领头链）； 另一条链延伸的方向与复制叉前进的方向相反，它显然不能被连续合成，需要复制叉推进了一定的长度，有了一段DNA单链后，才能以它为模板合成一个片段。因此这条新链的合成是不连续的，而且总晚于先导 链，所以称为随后链。 这种先导链连续合成，随后链断续合成的方式，称为半不连续