第五章 细菌和噬菌体的重组和连锁.pptVIP

第一节 细菌和病毒在遗传学研究中的地位 第二节 细菌的遗传分析 第三节 噬菌体的遗传分析 本章要点 第一节 细菌和病毒在遗传学研究中的地位 细菌和病毒在遗传学研究中的优越性: ①繁殖速度快、世代所需时间短，缩短了实验周期； ③便于研究基因的突变：细菌和病毒均属于单倍体，所有突变都能立即表现出来，不存在显性掩盖隐性的问题 ； ④便于研究基因的作用：通过基本培养基和选择培养基的影印培养，很容易筛选出营养缺陷型，利于生化研究。 ⑤易于管理和进行化学分析：个体小，繁殖方便，可以大量节省人力、物力和财力；且代谢旺盛，繁殖又快，累积大量的代谢产物。 ⑥遗传物质较简单，便于用作研究基因结构、功能及调控机制的材料。 ⑦可作为研究高等生物的简单模型； 第二节、细菌的遗传分析 一、细菌概述 ①无真正的细胞核， 只有染色体区，称拟核区。 不进行减数分裂和有丝分裂。 而是简单地复制和一分为二。 ②缺乏线粒体、叶绿体等细胞器。 ③单细胞生物，其染色体为环形、 裸露双链DNA分子，较易插入DNA片断。 （一）细菌的突变型 （二）突变型的筛选 1. 根据菌落特点筛选——选择培养基：如Lac-突变菌株在伊红-美蓝培养基（EMB）上形成白色或粉红色菌落，而lac+菌落为有金属光泽的紫色菌落。 2. 抗性突变型的筛选：将细菌涂布在含有某种抗生素或噬菌体的培养基上，能形成菌落的就是抗性突变菌株。 3. 营养缺陷型的筛选：用印迹法把在完全培养基上生长的菌落影印到基本培养基上，鉴别出不能生长的克隆。再把它们转移到含有单一营养物质的培养基上，判定该突变型需要哪一种营养物质。 接合：由供体菌和受体菌之间的直接接触而导致的遗传物质的单向转移。接合管的形成：菌株靠近→细胞膜融合→两细胞间形成接合管 性导：是接合的一种，F?因子所携带的细菌基因通过接合而导入受体细菌。 转导：由噬菌体所介导的DNA从供体菌到受体菌的转移。 一 细菌的杂交1、大肠杆菌杂交试验 2、U实验 1950年Davis（戴维斯），做了U实验，在U底部中间用滤片隔开，交替吸压 结果不同，表明A、B有性杂交作用不同，提出遗传物质单向转移。 供体：提供遗传物质的细菌 雄性 A 受体：接受遗传物质的细菌 雌性 B 所以 A→B 不久发现导致单向转移的是细胞质中一个微小可转移因子—— F因子 四、大肠杆菌 F- F+ Hfr F?菌株 （一）F- F+ 菌株 1、F因子结构: 细胞质中环状DNA 原点：转录起点 形成性伞毛的基因群：通过性伞毛与F-细菌接合 。 DNA复制酶基因：与F因子本身的复制有关； 插入序列：与其插入细菌染色体的过程有关。 2、F因子存在方式 游离状态：在细胞质中 ，能自我复制独立遗传 整合状态：整合到细菌环状染色体上，与细菌染色体一起遗传。 3、F因子的特性 （1）决定大肠杆菌育性： F+菌株，含游离F因子 供体 雄性 F－菌株，无游离F因子 受体 雌性 （2）F因子高频率转移 当F+×F－, F+的F因子复制为二,通过接合管将F因子传递给F－菌株,使F－转变为F+,频率高达95%,即高频率的转移F因子. F因子转移：F因子从原点断裂，以原点为先导，边复制边转移（因此叫滚环复制），复制后的F因子转移到另一个细胞中。细胞分开，使F-变成F+。 3 基因重组的频率低 当F+×F－,F+菌株环状DNA复制通过接合管进入F-细菌细胞，与F-细菌的基因交换，使基因重组，但频率很低，不到百万分之一。 4 F因子可以自发丧失 （二）高频重组菌株 （Hfr菌株） 1951年，卡瓦里（Cavalli）等人，1954年海斯（Hayes）先后在A菌株中分离出新的菌株。 1、Hfr形成 F因子整合到细菌环状DNA上，这种整合状态F＋菌株叫Hfr（高频重组）。 2、特点 1 可以作为供体，与B杂交，重组频率比A×B高1000倍，称高频重组菌株。 2 转移F因子频率低 3、Hfr×F- 三 接合生殖和交换特点 1、接合生殖 供体细菌的DNA通过接合管进入受体细菌，实现基因重组的方式。 2、基因重组 （1）形成部分二倍体：一个完整的基因组和一个不完整的基因组所构成的二倍体。其中受体的基因组叫内基因子，供体的基因组叫外基因子。 外基因子转移到受体以后： a 以游离状态存在，随着细胞分裂代数的增加被稀释，消失； b）与内基因子发生交换、重组。 2 基因交换过程： 五 F-,F+,Hfr, F?细菌的相互转化 五、细菌的遗传作图 （一）利用中断杂交试验作图 叠氮化钠 噬菌体 乳糖 半乳糖 链霉素 Hfr azir tonr lac+ gal+ strs F-： azis