PCR仪和凝胶成像系统解析.pptVIP

内 容 PCR的反应原理及反应体系 PCR示例 凝胶成像系统 ⑴94~96℃ 30’’-3’ 预变性（使模板充分变性） ⑵94℃ 30’’ 变性 ⑶45-65℃ 30’’-1’ 复性（使引物与模板充分退火） ⑷72℃ n’ 延伸 (按1’扩增1kb计算） ⑹72℃ 3-7’ 总的延伸（使产物延伸完整） ⑺4-10℃ 保存 以PCR为基础的相关技术 逆转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR) 实时荧光定量PCR (quantitative PCR ) 多重PCR (multiplex PCR) 免疫PCR 差异显示PCR (differential display PCR, DD-PCR) PCR诱导定点突变 原位PCR (in situ PCR) 多重PCR技术的难点在于其多对引物的设计，必需保证多对引物之间不形成引物二聚体，引物与目标模板区域具有高度特异性 原位PCR(In situ PCR)原位PCR是指在组织或细胞标本片上直接进行PCR，对细胞中的靶DNA进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。可分为直接法和间接法。基本步骤：组织切片或细胞固定→蛋白酶消化→原