PCR法突变体质粒构建概要.pptVIP

图10：小提质粒 1-3：不同单克隆 4： EcoRλ14 marker 5-8：不同单克隆 1 3 2 4 6 5 7 8 图11：BamHI/XhoI酶切验证 1-7．不同单克隆酶切 8. DL2000 marker 1 2 3 4 5 6 7 8 736bp → 预期实验结果与讨论 思考题： 质粒电泳为什么有多条带？ 图11未切出片段可能原因？ 图12：EcoRI单酶切阳性结果 1-2. 单克隆1酶切 3-4. 单克隆3酶切 5. DL2000 marker 1 2 3 4 5 245bp → 预期实验结果与讨论 ←736bp 1 2 3 图13：酶切验证非突变体质粒 DL2000 marker EcoRI单酶切pc3.1-CDS BamHI与XhoI双酶切pc3.1-CDS PCR法突变质粒构建 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 标准的PCR反应体系 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 　　　　 　各10～100pmol 模板DNA 　　　 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 　　　　　 1.5mmol/L 72℃ 94℃ 55℃ PCR循环 1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间（min） 温度 （℃） PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 适温延伸 3