qPCR技术概述概要.pptVIP

2.qPCR原理和方法 —定量原理 * * 2.qPCR原理和方法—定量原理 * * Fluores cence 2.qPCR原理和方法—定量原理 * * Ct值的定义： CT值： C代表Cycle，T代表阈值(threshold)， CT值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。 CT值由阈值确定 2.qPCR原理和方法—定量原理 * * 阈值(threshold) 缺省值设定为基线（baseline，即本底信号）范围(3-15个循环)内荧光信号强度标准偏差的10倍。? 阀值由基线确定 2.qPCR原理和方法—定量原理 * * 理想的PCR反应: Xn＝X0 * 2n Xn ：第n次循环后扩增产物数量 X0 ：起始模板数量 n ：扩增循环数 2.qPCR原理和方法—定量原理 * * 非理想的PCR反应: Xn＝X0 * (1+En)n Xn：第n次循环后扩增产物数量 X0 ：起始模板数量 n： 扩增循环数 En: 扩增效率 2.qPCR原理和方法—定量原理 * * 在扩增产物达到阈值线时: XCt=X0(1+Ex)Ct=M ---------------- (1) XCt：荧光扩增信号达到阈值强度时扩增