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Shinji Feng @ NNSZ 酶学 Enzyme -- Shinji Feng 南宁三中生物奥赛培训第二轮 Shinji Feng @ NNSZ 酶的结构 单纯酶：蛋白质 只有一条肽链构成的酶又称单体酶。 结合酶：蛋白质 + 非蛋白部分 （酶蛋白） （辅助因子） 辅因子 辅酶：透析可分离的离子、小分子 辅基：透析不可分离的有机小分子 把离子另分为一类辅助因子。 决定酶的特异性 和高效性 决定酶促反应 的类型 Shinji Feng @ NNSZ 酶的结构 酶的必需基团 活性中心内的必需基团 结合部位：决定酶的专一性 催化部位：决定反应的性质 活性中心以外的必需基团 维持酶的特殊空间构象 酶的非必需基团 Shinji Feng @ NNSZ 酶的作用特点 酶的专一性 绝对专一性：催化一种底物的一种反应，例如脲酶。 相对专一性：催化一类底物或一种化学键的一种反应，例如蛋白酶和蔗糖酶。 立体异构专一性：催化一种立体异构体的一种反应，例如乳酸脱氢酶（只催化L-乳酸）。 不同蛋白酶的切割位点 胃蛋白酶：切割Phe、Tyr、Trp、Leu羧基端。 胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）：主要切割Trp、Tyr、Phe的羧基端；也切割Leu、Met的羧基端。 胰蛋白酶：切割Arg、Lys羧基端。 木瓜蛋白酶：切割Arg、Lys羧基端。 凝血酶：切割Arg-Gly之间的肽键。 羧肽酶：从羧基端开始逐个切除氨基酸残基。 CNBr（溴化氰）可使Met羧基端肽键断裂。NH2OH（羟胺）在Ph 9时可使Asn-Gly断裂。 Shinji Feng @ NNSZ Shinji Feng @ NNSZ 酶的作用机制 1. 酶只通过降低反应活化能来加快反应，不影响反应的平衡。 2. 酶对可逆反应的正负方向催化作用相同！生理上不可逆的反应是通过反应物的浓度实现的。 3. 催化作用发生于酶的活性部位。活性部位由酶的必需基团构成，这些基团在空间构象中接近，但一级结构上相距较远。 Shinji Feng @ NNSZ 酶的作用机制 基本模式：E + S ? ES ?E+P 催化机制： 熵效应和轨道导向 共价催化（Ser、Cys、His、Lys残基） 酸碱催化（His残基） 底物的扭曲 接近效应 盐键、氢键、范德华力、疏水力 Shinji Feng @ NNSZ 影响酶促反应的因素 酶浓度[E] 底物浓度[S] 温度 pH 激活剂：提高酶活性，缺乏不一定失活 抑制剂：降低酶活性，不能使酶变性 （假设[S] [E]） Shinji Feng @ NNSZ 酶促反应的动力学 米氏常数和米氏方程： （假设[S] [E]） Shinji Feng @ NNSZ 酶促反应的动力学 Vmax与[E]成正比，并与温度、pH、离子强度等有关。 对某一特定的酶和特定底物，Km是一个特征常数，称为米氏常数。当k-1 k2（或写成k2 k3）时，Km反映了酶与底物的结合能力和牢固程度。 注：有的书上将ES?E+S的平衡常数k-1记作k2，而将ES?E+P的平衡常数k2记作k3。 Shinji Feng @ NNSZ 酶促反应的动力学 V0-[S]作图 Shinji Feng @ NNSZ 酶促反应的动力学 双倒数作图 Shinji Feng @ NNSZ 同工酶 同工酶：催化同一种反应的不同的酶。 ①乳酸脱氢酶（LDH）的同工酶：H和M两种亚基组成四聚体。 H4（心肌），H3M（血清），H2M2，HM3，M4（肌肉、肝） ②肌酸激酶（CK）的同工酶：M和B两种亚基组成二聚体。 MB（心肌），MM（骨骼肌），BB（脑） Shinji Feng @ NNSZ 同工酶与医学诊断 同工酶在医学诊断中的应用： 血清[H4] [H3M] ?心肌梗塞 血清[M4] [H3M] ?肝脏或骨骼肌疾病 血清[MB]异常升高 ?心肌梗塞 Quiz：同工酶在临床上的价值是否取决于个体之间的遗传差异？ Shinji Feng @ NNSZ 辅酶和维生素 1、作为辅酶的离子（也称为必需激活剂） Zn2+：乙醇脱氢酶 Mg2+：激酶 Fe2+：固氮酶、过氧化物酶 Mo2+：固氮酶 Cu2+：细胞色素氧化酶 注：Cl-是唾液淀粉酶的非必需激活剂。 Shinji Feng @ NNSZ 辅酶和维生素 2. 作为辅酶的维生素及其衍生物 VB1（硫胺素）：脱羧 VB2（核黄素）：递氢（FAD、FMN） VB3（泛酸）：转酰基（CoA） VB5（VPP）：脱氢（NAD+、NADP+ VB6（吡哆素）：转氨基，脱羧 VB7（生物素）：固定CO2，羧化 VB11（叶酸）：转递一碳单位（四氢叶酸） VB12（钴胺素）：一碳单位代谢，转甲基 Shinji Feng @