2.2.1动物细胞核移植技术讲义.ppt

* 让学生思考如下问题： 1、从个体发育的角度看，选取什么样的组织作为培养对象？ 2、怎样将动物活体组织分散成单个细胞？可以用胃蛋白酶处理吗？为什么？蛋白酶处理组织会不会破坏细胞的结构？ 3、培养基是用液体的还是固体的？培养基中应加入哪些营养物质？ 4、培养动物细胞时放在什么样的温度下，对培养液的PH值有什么要求？培养瓶中的气体由要求吗？ 5、怎样防止培养液当中混入细胞菌或病毒？ 6、动物细胞能无限增殖下去吗？——一般10代以内可以保持正常核型不断增殖，从10代到50代细胞增殖会逐渐减慢直至完全停止。少数细胞由于传代过程中细胞核型发生改变突破了接触抑制可无限增殖下去成为不死性的细胞。 1、卵母细胞从哪来？——屠宰场废弃的卵巢中采集到卵母细胞，体外培养到减数二次分裂中期。 2、如何去除细胞核？——用微型吸管吸去卵母细胞核和第一极体，也可用射线或某些化学药物等处理细胞破坏受体细胞核。 3、对供体牛有何要求？——优良品种 4、克隆动物的过程中实际有哪些技术支持？——动物细胞培养、核移植、胚胎移植 5、克隆牛的性别和主要性状与哪头牛相同？为什么？——性别和主要性状都与供体牛相同，因为哺乳动物的性别是由性染色体组成决定，克隆牛的染色体全都来自供体牛，因此相同；主要性状由细胞核中遗传物质决定的，因此也与供体牛相同。 6、克隆牛的性状与供体牛完全相同吗？为什么？——不完全相同，一方面去核卵细胞质中带有少量的DNA，其控制的性状与供卵的细胞相同；另一方面，生物的表现型是由基因型与环境因素共同作用的结果，环境不同，表现型也可能不同。 7、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？——因为动物细胞培养在10代以内一般能保持正常核型，而传代到10代以上，则有可能出现变异的核型，遗传物质发生改变，不利于全能型的表现。 2.2 动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术 动物细胞核移植 动物组织块 细胞悬液 原代培养 传代培养 胰蛋白酶处理分散成单个细胞 幼龄动物的器官组织；动物胚胎 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 加入培养液 用胰蛋白酶等处理贴壁细胞 适宜条件 不死性细胞 思考：细胞株和细胞系的区别？ 温故而知新 母绵羊A 乳腺细胞（体细胞） 母绵羊B 未受精的卵细胞 母绵羊C “多莉” 新的卵细胞发育成早期胚胎 去核卵细胞 提取细胞核 核移植 胚胎移植 动物细胞核移植技术 克隆羊 二.动物体细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。 分 类 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 一 、 动物核移植概念： 克隆动物--无性繁殖 电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎 卵母细胞采集、培养 MⅡ期卵母细胞 供体牛 供体细胞注入去核卵母细胞 代孕母牛 克隆牛 体细胞培养 去核卵母细胞 去核 胚胎 移植 体细胞核移植过程（体细胞克隆动物） 二 、体细胞核移植的过程： 请看教材P48图2-21 思考： 1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用此细胞作为受体细胞有什么好处？ 2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？ MⅡ中期卵母细胞 诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成 细胞分裂和发育进程。 卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富，提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞核体现全能性的物质。 整个过程用了哪些技术？ 动物细胞培养、动物核移植、胚胎移植 新生牛的性别、核基因？ 与供体相同 繁殖方式？ 无性繁殖 原理？ 动物细胞核的全能性 体细胞克隆出的猪 胚胎细胞克隆出的猴 P49讨论： 1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部 来自有重要利用价值的动物提供的体细胞。 10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞。 2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？ 3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有 少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵 母细胞。 此外，生活的环境不会完全相同，从这一角 度看，克隆动物不会是核供体动物100%的复制。 三 、体细胞核移植技术的应用前景： 1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程 2、保护濒危物种 3、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植 4、了解胚胎发育和 衰老过程；追踪研 究疾病