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第七章 核酸的生物合成 本章内容： 中心法则 DNA的复制 逆转录 转录 RNA的复制 一、中心法则 1.中心法则定义： 早在1958年，Crick就提出了中心法则。由DNA决定RNA分子的碱基顺序，又由RNA决定蛋白质分子的氨基酸顺序的理论。 2.中心法则内容 3.基本概念 复制：以原来DNA分子为模板合成出相同分子的过程。 转录：在DNA分子上合成出与其核苷酸顺序相对应的RNA的过程。 逆转录：以RNA为模板合成出DNA的过程 翻译：在RNA的控制下，根据核苷酸链上每三个核苷酸决定一种氨基酸的规则，合成出具有特定氨基酸顺序的蛋白质肽链的过程。 二、DNA的复制 半保留复制 1.定义： 子代DNA分子一条为亲代链，另一条链则是新合成的 2.生物学意义： 有助于遗传的稳定性 3.实验证明 II. 参与原核生物DNA复制的酶和蛋白质因子 引物酶 DNA聚合酶 解螺旋酶（解链酶） 单链DNA结合蛋白（SSB） DNA连接酶 拓朴异构酶 引物酶的功能： 合成一段几个~十个核苷酸RNA片段作为引物，它关键的作用是为DNA聚合酶提供了一个自由的3`-OH 。 RNA引物作用： 引发DNA的合成 引物酶的结构 组成较复杂，只有组成引发体后才具备活性 DNA聚合酶的种类： DNA聚合酶I， DNA聚合酶II， DNA聚合酶III 聚合方向：5`→3` DNA聚合酶的组成 1.DNA聚合酶I：一条多肽链组成，胰蛋白酶处理后，裂解为大小两片段，大片段称为Klenow片段，具有5`→3`聚合活性；小片段具有5`→3`外切活性，主要负责切除引物。 2.DNA聚合酶II：由四个亚基组成，酶活性较低。 3.DNA聚合酶III：由多个亚基组成， α、 ε、θ三亚基组成核心酶， α亚基具有5`→3`聚合活性；ε亚基具有3` → 5`外切活性，由校对功能；θ具有组建功能。 随着DNA双链不断解开，将使DNA进一步产生超螺旋。如果让这些超螺旋传到DNA分子的末端才释放，那么对大肠杆菌而言，将使DNA以每分钟2万转的速度旋转，显而易见，这种情况在细胞中是不会发生的；而对于环状DNA分子来讲，还不能以这种方式来释放。因此，必须使超螺旋分子成为松驰的状态，这正是拓朴异构酶的作用。 III. DNA复制的过程 合成的方向：5`→3` 反应通式： （dNMP）n-3`-OH+dNTP→（dNMP）n+1-3`-OH+PPi 原料：dNTP 复制分三个阶段： 1.起始 2.延长 3. 终止 1.起始 起点：起点是一段特殊的序列所组成；原核生物只有一起点；真核生物有多个起点。 起始过程： ⒈首先，解螺旋酶利用水解ATP所释放的能量，解开DNA双螺旋，形成复制点。复制点的形状象个叉子，故称复制叉。 2.延长 DNA链延长： DNA聚合酶Ⅲ， 5`→3`。 半不连续复制： 我们知道，DNA双螺旋是反向平等的，一条链是3` → 5`，则另一条链的方向就是5` → 3`。复制时，以亲代链3` → 5`为模板时，新链的合成方向是5` → 3`，能使新链持续延长,但另一条链5`→3`不能连续合成。 冈崎片段 复制时，不连续合成的小片段。 前导链 滞后链 复制叉上仅结合了一套DNA聚合III，前导链与滞后都是由同一套DNA聚合酶完成的。滞后的模板链要形成环，穿过DNA聚合酶才能保证两条链的合成方向均为5`→3`。 3.终止 复制终点： 通常是复制起点 DNA聚合酶I ： 切除引物，并填补空缺 DNA连接酶： 将相邻的两个DNA片段连接起来 复制全过程 DNA复制过程基本特点 半保留复制 有特定的起点（原核生物为单起点，真核生物为多起点） 需要RNA作为引物，以后引物被切除，补上DNA DNA合成方向是5`→3` 复制可以是单向，也可以是双向，但速度不一定相等 半不连续复制，有前导链（连续）和后滞链（不连续）之分 三、逆转录 逆转录：以RNA为模板合成DNA的过程，即遗传信息从RNA传递到DNA。 逆转录酶催化新链合成的方向：5`→3` 逆转录酶具有以下三种活力： RNA指导的DNA聚合酶活力； DNA指导的DNA聚合酶活力； RNA水解酶活力。 逆转录酶合成DNA的过程 以RNA为模板、dNTP为底物，合成一条互补的DNA（称cDNA），即RNA-DNA链 水解RNA-DNA杂交分子中的RNA 以新合成的DNA链为模板合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子（前病毒） 前病毒整合致电细