细胞游离亚铁原卟啉检测技术精读.ppt

细胞游离亚铁原卟啉（Cells Free Ferrous Protoporphyrin FH）是恶性肿瘤发生过程中产生的因果性生物标志因子。 FH是含亚铁原卟啉蛋白的分解产物。 FH具有强氧化作用，导致细胞自稳调节功能紊乱。 FH含量具有连续可测量性，且与细胞癌变程度呈密切正相关。采用直接生物学介质（组织渗液）进行靶向定位检测，即可显示细胞恶变过程。 细胞游离亚铁原卟啉 （FH） 主要来源 线粒体 在病理情况下，亚铁原卟啉从细胞蛋白析出，成为细胞游离亚铁原卟啉，不仅没有生物学功能，反而能引起细胞和组织器官的氧化损伤。 细胞游离亚铁原卟啉 （FH） 生成机制 【细胞能量代谢重编程】 以6-磷酸葡萄糖开始，在6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下形成6-磷酸葡萄糖酸，进而代谢生成以磷酸戊糖为中间代谢物的过程，称为磷酸戊糖途径，简称PPP途径。 反应部位：胞浆 重要反应产物：NADPH、5-磷酸核糖 限速酶（启动因子）：6-磷酸葡萄糖脱氢酶 6-磷酸葡萄糖脱氢酶的活性与抑癌基因p53有关。p53基因因编码一种分子质量为53kDa的蛋白质而得名，是一种抑癌基因。一旦p53基因发生突变，P53蛋白失活，细胞分裂失去节制，发生癌变。 谷胱甘肽过氧化物酶以还原型谷胱甘肽 GSH 作为供氢体来分解H2O2，生成氧化型谷胱甘肽 GSSG ，使细胞内GSH:GSSG的比率下降。GSH生成GSSG过程中形成肿瘤细胞的低氧状态，激活氧感受器和缺氧信号传导通路。 氧感受器分子导致蛋白质的巯基由氧化型向还原型转变，促使缺氧特异性转录因子-低氧诱导因子（hypoxia-inducible factor；HIF ） HIF-1a的磷酸化并与HIF-1b结合而形成一个完整的HIF-1转录复合体，从而与相应靶基因上的缺氧反应元件 HRE 结合，促进基因的表达.并通过第二信使-活性氧族 ROS 与激酶系统发生联系，激活下游酶系统。 细胞在代谢过程中通过Fenton反应产生产生一系列活性氧族（reactive oxygen species,ROS），包括：O2-、H2O2 及HO2·、·OH等。ROS 可双向调控细胞的凋亡和增殖，机体内的自由基通过其浓度调节着机体细胞的生死平衡，对转录因子的激活以及对细胞增殖的促进。 由于瓦格博效应，在低氧诱导因子（hypoxia inducible factor，HIF）的介导下，血管内皮生长因子（V EGF） mRNA转录和稳定性增加，且VEGF受体表达上调， VEGF的生物学效应增强。其表达的结果是增加血管分支形成, 增强血流量。 还有的学者特别强调自由基的作用，认为亲脂性物质进入含亚铁原卟啉蛋白疏水核，与蛋白中心的Fe2+通过Fenton反应产生 ．OH。 ．OH具有极高的氧化还原态势，反应力极强，几乎可以和生物细胞内所有类型的分子以s-1化学反应0级（相当于几个飞秒，1飞秒只有1秒的一千万亿分之一）的反应速率作用。 但是，．OH寿命短暂，因而最靠近 ．OH的部位受到攻击的可到性也最大。位居线粒体内膜基粒基片的含亚铁原卟啉蛋白由于在空间位置上的态势，首先受到 ．OH的攻击，共价键断裂，其结构遭到不可逆转的破坏，FH析出。 DNA损伤检查点 （DNA damage checkpoint） DNA复制检查点 （DNA replication checkpoint） 纺锤体组装检查点 （spindle assembly checkpoint） 人类具有两个基因组： 核/染色体基因组（nucleic genome 线粒体基因组 mitochondrial genome 一般认为线粒体基因组（mtDNA）的自发突变率远较核基因组（nDNA）高，约10-20倍。 mtDNA在nDNA内的整合可能通过两条途径引起细胞癌变： 1、通过引起核基因组的不稳定性发生癌变； 2、通过改变细胞能量产生，提高线粒体氧化压力，引起线粒体酶表达异常和/或调控凋亡等途径来影响细胞的生物学行为，使其发生恶变。 囊泡运输是生命活动的基本过程，细胞内的膜性细胞器之间的物质运输 如蛋白质、脂类 ，主要是通过囊泡完成的。囊泡是细胞内物流的集装箱。钙离子是囊泡释放的开关。苏德霍夫发现，囊泡表面有一种结合蛋白，该蛋白只有在钙离子定向流动时才能与细胞膜表面的另一种蛋白结合，从而促进囊泡运输功能。 关于细胞癌变 carcinogenesis 的具体机理还存在争议和分歧。 1、体细胞突变（somatic mutation）假说：主要包括基因突变 gene mutation 假说和非整倍体 aneuploidy 假说； 2、表型遗传修饰（epigenesis）改变假说； 3、肿瘤干细胞假说； 4、对称分裂抑制机制紊乱假说； 5、干细胞不对称分裂机制紊乱假说 （1）基因