第10章_酶促反应动力学汇总.ppt

稳态时ES浓度不变 反应速度 V=k3[ES] ES的生成速度=消耗速度 k1[E][S]=k2[ES] + k3[ES] E的质量平衡方程 [E]=[Et] - [ES] a.当[S]很小时 V=V[S]/Km 一级反应 Km=? Km = [S] ①Km是酶的特性常数： 与pH 、温度、离子强度、酶及底物种类有关，与酶浓度无关，可以鉴定酶。 蔗糖酶米氏常数（Km）的测定 1. 配12支蔗糖底物溶液，浓度分别为0、0.005、0.00625、0.0075、0.00875、0.010、0.0125、0.015、0.02、0.025、0.0375、0.050M，在35℃水浴保温； 2. 加入3U/ml已在35 ℃水浴保温的酶溶液，准确作用5分钟，终止反应； 3. 各吸取0.5ml反应液与3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5分钟，冷却后在540nm测定吸光度OD值； 4. 作图 依据： 能否用透析、超滤等物理方法 除去抑制剂，使酶复活。 1、不可逆抑制作用 ： 抑制剂与酶必需基团以牢固的共价键相连 很多为剧毒物质 重金属、有机磷、有机汞、有机砷、 氰化物、青霉素、毒鼠强等。 不可逆抑制剂 ? H2N-CH-COOH ? CH2 ? SH 如何紧急救治？ 排毒 洗胃、喝鸡蛋清牛奶 导泄、利尿 血液透析（清除游离状态毒物） 解毒药：解磷定 ④有机汞、有机砷化合物 ——与酶分子中-SH作用； 可通过加入过量巯基化合物解除。 ⑤氰化物、硫化物和CO ——与酶中金属离子形成稳定的络合物 如氰化物与含铁卟啉细胞色素氧化酶结合 ⑥青霉素（penicillin） 与细菌糖肽转肽酶Ser-OH活性， 影响细胞壁合成。 （2） 专一性不可逆抑制剂 ①Ks型 具有底物类似的结构——（设计） 带有一活泼基团：与必需基团反应（抑制） ∵利用对酶亲合性进行修饰 ∴亲合标记试剂（affinity labeling reagent） 抑制作用可通过透析等方法除去。 原因：非共价键结合 （1）竞争性（Competitive)抑制 利用竞争性抑制是药物设计主要思路 磺胺类药抗菌机理： （与对氨基苯甲酸是结构类似物） 竞争性抑制细菌叶酸形成，抑制细菌繁殖 人通过食物直接补充叶酸，对人无毒害。 上图反映出温度如何影响酶活力？ 最适pH因酶而异，多数酶在5.0-8.0左右 ①无机离子 阳离子 K+、Ca2+、Na+、Mg2+、Zn2+等 阴离子 Cl -、Br -等 七、底物浓度对酶活性的影响 在最适条件下，当底物浓度远远大于酶浓度时，增加酶浓度可以提高反应速度，酶促反应速度与酶浓度成正比例关系。 （3）反竞争性（Uncompetitive ）抑制 1：反应体系不加I 2： 体系中加入 一定量不可逆抑制剂 3：体系中加入 一定量可逆抑制剂 v 1 2 3 [E] (三)可逆和不可逆抑制作用的鉴别 [E] v 不可逆抑制剂 的作用 [E] v 可逆抑制剂 的作用 [I ]→ [I ] (四）可逆抑制作用动力学 1.竞争性抑制 斜率 斜率 Km 变大，Vmax不变 2.非竞争性抑制 截距 Km不变，Vmax变小 3. 反竞争性抑制作用 Km、Vmax都变小 产物累积量 相对酶活％ 最适温度 最适温度 动物酶 35~40℃ 植物酶 45~50℃ 微生物 大部分 40~50℃ 个别高温菌 90℃以上 四、温度对酶反应的影响 温度越高，活化分子越多，反应速度快； 酶变性时间越短，反应速度下降也迅速。 五、pH 对酶反应的影响 最适pH时的酶活力最大 是酶的特性之一 六、激活剂对酶反应的影响 斜率= 1/Vm Km/Vm -Km [S]/V [S] v Vmax [S]