第四章抗生素效价的微生物检定法.ppt

第四章：抗生素效价的微生物检定法教学目标：１.解释抗生素概念、叙述医疗用抗生素特点、了解抗生素的主要作用机制 ２.叙述抗生素的效价和单位及其表示方法 ３.熟知抗生素效价检定操作与基本要求 ４.述说测定原理 讲授新课：第一节 概述 一、抗生素的概念:抗生素主要是由微生物所产生的极微量便具有选择性地杀死或抑制它种生物或肿瘤、细胞生长的一类天然有机化合物。 二、医药用抗生素的特点具备以下4个特点才能应用到临床。 　(1)有较大的差异毒力 　是由抗生素的作用机制决定的,如青霉素类抗生素能抑制细菌细胞壁的合成，而对人与哺乳动物没有影响,因而该类抗生素具有明显的差异毒力。 　(2)抗菌活性强 抗菌活性的强弱常用最低抑菌浓度(MIC)来衡量，MIC值越小，表示活性越强。 　(3)抗菌谱广 即指各种抗生素所能抑制或杀灭微生物的范围，范围广谱者称为广谱抗生素，即对多种病原菌都有抑制和杀灭作用；范围窄的为窄谱抗生素，如青霉素主要抑制革兰阳性菌，多粘菌素只能抑制革兰阴性菌，而具有抗肿癌作用的抗生素则称为抗肿瘤抗生素。 　(4)不产生副作用和不良反应 良好的抗生素应对机体无毒性，不引起变态反应，不易使病原菌产生耐药性。 三、抗生素效价微生物测定技术 （一）概述 　浊度法系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的种方法。 　管碟法：是利用抗生素在含敏感试验菌的琼脂培养基中的球面扩散渗透作用，从而形成一定的抑菌圈。通过琼脂培养基，可观察并测量出抑菌圈的大小。在一定的抗生素浓度范围内，对数剂量(浓度)与抑菌圈的表面积或直径成正比 （二）抑菌圈的形成 　　将不锈钢小管(俗称为牛津杯)放置在含敏感试验菌的琼脂培养基上，将抗生素溶液注入小钢管中，抗生素分子随溶剂向培养基内呈球面状放射状扩散。同时将培养基置入适宜试验菌生长的培养箱中，琼脂培养基中的试验菌开始生长。抗生素分子在琼脂培养基中的浓度，随离开小钢管的距离增大而降低，离小钢管愈远，琼脂培养基中抗生素分子愈少，相应的抗生素浓度愈低。当抗生 素分子扩散到一定时间，在 小钢管周围形成一个能有效 的抑制试验菌生长的范围， 也就是通常所说的抑菌圈。 抗生素溶液的浓度不同，抑 菌圈的大小亦不同(图4－1)。 按设计原理不同分 　　 第二节 抗生素的效价和单位 一、抗生素的效价和单位 抗生素的含量用效价和单位表示。该词有时不加区别统称为效价单位。 效价（ｐotency）－指检品的实际单位数与其标示量的比值。常表示为效价的百分数。效价是从比较检品与标准品的生物活性而得。在不同的微生物效价测定中，效价计算的公式见后述。 单位（unit,u）单位是衡量抗生素有效成分的具体尺度。各种抗生素的单位含义不同，在习惯上根据它们的实际发展情况而定，抗生素效价单位的具体表示方法见后述。 标准品与国际单位(international unit,iu) 抗生素微生物测定用的标准品，除国内的新品种外，凡已制备国际标准品的品种，在制备国家标准品时，均与国际标准品比较而定出效价。 二、抗生素的效价单位的表示方法 第三节 管碟法测定操作 1. 试验用菌液(见表4-4)、缓冲液、培养基的制备 按药典规定进行制备。 抗生素效价检定管碟法操作流程 二、影响因素的控制 1．直线斜率的控制　　　斜率小，即抗生素浓度差异小，而抑菌圈的直径差异大，灵敏度的准确性高。 4．培养基的厚度H、试验菌敏感度C、扩散系数D的影响 　　H增大，r缩小；H减小，r增大。C常受加菌量及对抗生素耐药性等因素的影响而有所改变，从而影响r大小。T受细菌生长快慢的影响而引起r改变。D扩散快慢亦可使r改变，因此应注意选用敏感性的试验菌并保持其不变异，特别要防止染菌，制备菌层时含菌浓度要适宜，可采用预试验来确定；向小钢管内滴加标准溶液和供试溶液时要交叉进行，以免偏向。 5. 剂量反应直线范围控制 　　　直线范围在下列情况下会缩短：管径小、装量小；浓度低；因培养基或试验菌吸附或破坏抗生素等因素使小钢管中抗生素量下降，导致直线范围缩短，常使呈弧形。为此可用调整缓冲液的pH值，使抗生素稳定；调整培养基pH值；调整培养基的处方及除去杂质；选用更为敏感的试验菌加以控制。 6. 抑菌圈圆整及清晰度的控制　　抑菌圈常有破裂不圆，甚至无圈现象。这些情况的产生主要是由于向小钢管加抗生素溶液时有溅出或漏出；有时也可能因双碟或小钢管残留或污染有抗生素而造成的。如果污染杂菌或因菌层培养基温度过高，试验菌被烫死，均会使抑菌圈不