生物化学工程基础(第二章)预案.ppt

2. 微生物的热死规律－－对数残存规律 加热－－微生物失活－－酶、蛋白质变性－－杀死 　　培养基中微生物受热死亡的速率与残存的微生物数量成正比即： dN/dt = － KN 式中： N--- 培养基中残存的活菌数（个） t－－受热时间（min) K－－反应速度常数（min-１)（比死亡速率） K随着微生物的种类和加热温度而变化 微生物减少的速度与任一瞬间残存的菌数成正比； 在一定温度下，比死亡速率Ｋ值，随为微生物不同而不同。在相同温度下，Ｋ值越小，微生物越耐热。 同种微生物在不同温度下灭菌K值不同。灭菌的温度越低，Ｋ值越小。 从0→t, No → Nt积分得 灭菌的时间　污染的程度（No） 　　　 灭菌的程度（Nt） k值 ----对数残存定律 t ：表示理论灭菌时间 一般只用于工程计算中，在实践过程中，因蒸汽的压力问题（不稳定）、蒸汽的流量问题有很大差别，甚至培养基中的固体颗粒的大小、培养基的粘度等因素，都会影响灭菌效果 间歇灭菌，121℃，20—30分钟 连续灭菌，130℃，20—30s，在 维持罐中保温6-8分钟。 实际生产中，通常采用经验数值： N0 ： 芽孢性细菌总数 + 芽孢数 对于如何Nt取值？ 如果取Nt= 0，那么，t → ∞，这显然是与现实情况不符。 通常取Nt = 10-3 Q: 这个数值如何理解？ 灭菌1000次，有一次是失败的，残留了一个活菌体。这个数值的取值的大小，也间接反应了该生产过程中的技术管理水平。 3.　培养基灭菌温度的选择 (why?) 　 培养基加热灭菌时：杂菌死亡和培养基营养成分破坏 灭菌时，微生物的死亡属于一级化学反应类型 　 在其他条件不变时，反应速度常数与温度的关系遵循阿累尼乌斯方程 　　　 Ｋ＝Ａe-E/RT 式中：Ａ－比例常数　　 E－杀死杂菌所需的活化能 R－气体常数　　 T－绝对温度 在灭菌的过程中，伴随微生物的死亡，培养基中的营养成分也遭到破坏。由于大部分培养基的破坏为一级分解反应，其反应动力学方程式为： 式中：c——反应物的浓度，mol/L； t——反应时间，min； k′—营养成分破坏的反应速度常数，min-1 在灭菌的同时，培养基中的营养成分也遭到破坏，其他条件不变，则反应速度常数和温度的关系可用阿累尼乌斯方程表示： 式中：?′——比例常数； E′——反应所需的活化能,，J/mol； R——气体常数；8.314 J/mol·k； T——绝对温度， K； 在灭菌时，随温度变化，菌体死亡速度常数和培养基成分破坏速度常数都在变化。　 当温度Ｔ１升高到Ｔ２时，分别应用阿累尼乌斯公式 　　可得　 杀灭芽孢的活化能Ｅ大于营养成分破坏的活化能E?。 随着温度的上升，微生物死亡速度提高，且超过了培养基养成分分解破坏的速度。工业生产中采用高温瞬时灭菌就是考虑杀死杂菌，而使营养成分破坏减到最低。----“高温瞬时灭菌法”的理论依据。 　 三、培养基的灭菌 1. 培养基灭菌的操作 连续灭菌：指培养基经过蒸汽灭菌后连续的进入 发酵罐。 连续灭菌的流程2 连续灭菌的流程3 连续灭菌的流程4 空罐灭菌（空消）： A. 洗罐、排出冷却管中冷却水 B. 在0.2MPa下，30分钟，染菌时可延长。 间歇灭菌： 培养基全部流入发酵罐后，在罐内通 入蒸汽加热至灭菌温度，维持一定时 间，在冷却到接种温度。 升温阶段 保温阶段 均有灭菌效应 降温阶段 发酵培养基实罐灭菌： 先预热90 ℃ ，根据罐容大小确定，一般121℃， 5-10分钟 泡敌实罐灭菌： 0.2MPa下保持30分钟 尿素罐灭菌： 105℃保持5分钟 管道灭菌： 接种管道、尿素管道、油罐管道、空气管道，0.15MPa