分子植物病理学验.docVIP

实验一 植物基因组总DNA的分离 分离植物核酸对大多数基因组分析以及利用遗传标记进行的作图研究而言，都是一个基本要求。同样，在鉴定和分离植物基因用于基因工程时也不例外。不同的研究目的对DNA的纯度和量的要求不尽相同。例如，在构建用于筛选植物基因或其他诸如RFLP这样的遗传标记基因组DNA文库时，需要使用高相对分子质量、高纯度的DNA；而在进行遗传分析时，对DNA纯度的要求就可以低一些，但其他要求如DNA的产量则显得更为重要了。 一般而言，一个好的DNA分离程序应符合以下几个主要标准： ·所得DNA的纯度应满足下游操作的要求：用于RFLP分析的DNA，其纯度的要求为可用限制性内切酶完全酶解并可成功地转移到膜上进行Southern杂交；用于PCR分析的DNA则应不含干扰PCR反应的污染物。 ·所得DNA应当完整，电泳检查时可给出精确性高、重复性好的迁移带型。 · 所得的DNA应有足够的量。例如，要研究多个遗传标记在某一植物居群中的分离情况，也许就要求从单株植物中提取的DNA可作100次分析；而在从大量植株中筛选一个单一遗传标记时，只需在一个Eppendorf 管中微量提取得到的DNA就绰绰有余了。 如果是对植物进行大规模筛选，还应当满足下面这项要求： ·操作程序应当快速、简便、价格低廉，并尽可能避免使用有毒试剂。 提取程序的原理 植物DNA的提取程序应包括以下几项： 首先，必须