微生物发酵法生产抗癌药物紫杉醇研究报告.pptVIP

微生物发酵法生产抗癌药物紫杉醇 二 微生物发酵法生产紫杉醇的技术路线 实验材料 罗汉松的树皮 实验方法 1 内生真菌分离 1）对植物组织表面进行消毒, 以控制表生真菌的生长, 使内生真菌得以分离。其分离方法是先用水冲洗已剪碎的植物材料, 然后在75%乙醇中浸泡3min 后,最后用无菌水冲洗。 2）分离所用的培养基为PDA 培养基。为了防止细菌污染可在培养基中加抗菌素, 如链霉素、四环素等。温箱中28 ℃培养3-4 d 后观察. 在分离内生真菌时常添加一些宿主植物的提取液，以满足内生真菌的一些特殊的营养需求 2 内生真菌纯化、鉴定与保存 待培养基上初步长出菌落后，选择长势较好的菌落，挑取菌丝到PDA平板上纯化，根据经典形态学方法鉴定菌种。纯化的菌株在PDA斜面4℃下保持，备用。 3 发酵培养 从PDA 平板上切取5 mm × 5 mm 小块菌落,接种至装有150 mL 液体培养基的500 mL 三角瓶中, 于28 ℃ , 100 r/ min 摇床上振荡培养10-14 d. 4 发酵产物的处理 1）紫杉醇的提取 常用的有机溶剂：甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯等 提取原则：能够充分萃取出发酵液和菌丝中的紫杉醇 具体方法： 发酵液过滤后, 菌丝研磨（加适量石英砂），滤液称量体积。 滤渣烘干( 低于50℃) ,滤渣用适量乙酸乙酯萃取, 滤液用1/2 滤液体积的乙酸乙酯萃取(