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电化学方法对食品安全的检测 年级：2014级 学号：2014102025 姓名：刘玥 电化学方法对食品安全的检测 俗话说“人是铁，饭是钢，一顿不吃饿得慌”，可见食品对于人类的重要性。随着全球经济的高速发展，食品安全成了民众关心的大事，如何才能确保食品安全则成为热点问题，其中作为食品安全的一种监控手段，食品检测的重要性就在过程中凸显出来了。由于食品安全引起人们的高度重视，所以对生产和供应无农药残留的农产品的要求越来越高。长期以来，农药因在防治农作物病虫草鼠害方面具有高效快速经济简便等特点而被广泛使用。然而，由于存在有毒农药的残留问题。所以成为环境食品等领域需要解决的突出问题农药残留通过食物链积累于人体后，导致一系列疾病的产生。人们在发展低毒高效农药的同时希望通过检测将农残控制在安全水平目前检测农药残留的常用手段主要有液相色谱，气相色谱质谱薄层色谱和气质联用等方法。虽然这些方法选择性和灵敏度较好但仪器昂贵操作繁琐，测定时间长且成本高，不易于现场快速检测，建立快速可靠灵敏的新型分析方法非常重要。近年来，电化学分析检测方法由于其仪器简单、检测成本低、检测速度快等特点在食品和环境中农药残留快速检测方面被广泛研究。 1.有机磷农药的检测 基于有机磷农药对AChE的抑制作用而发展的乙酰胆碱酯酶生物传感器因具有简单快速、灵敏度高、成本低等优点而被广泛用于有机磷农药的检测。其基本原理是：AChE与底物碘化乙酰硫代胆碱相互作用后生成具有电化学活性的硫代胆碱，产生不可逆氧化峰，当AChE受到有机磷农药抑制时，氧化峰电流会相应减少，进而通过氧化峰电流的降低值来判断有机磷农药对AChE的抑制程度，完成有机磷农药的定量检测。电化学传感器的构建过程中酶在电极上的固定是关键，目前是通过吸附法包埋法共价键合法溶胶-凝胶法交联法及电聚合法等方法。而直接将游离酶固定在电极表面，通过直接法制备的酶电极使酶在电极上容易流失重复性较低。 1.1.1电极制备 微晶纤维素置于14% NaOH溶液中活化1 d后，蒸馏水洗至中性抽滤干燥活化微晶纤维素与定量高碘酸钠NaIO4 质量比1:1置于水热合成反应釜内胆套中，蒸馏水填充系数0.6~ 0.9，130℃温度下密闭水热合成反应8 h ，所得固体反复冲洗抽滤干燥得到固载酶基质材料-双醛纤维素。在磷酸盐缓冲液中28℃温度下DAC与AChE磁力搅拌反应2.5 h后取出分离，用蒸馏水洗涤至无游离酶抽滤干燥制成固载酶DAC-AChE悬浊液，在4℃冰箱中保存备用。 玻碳电极分别用0.3和0.05u m的Al2O3 粉末在抛光布上进行抛光用大量二次蒸馏水冲洗后，将玻碳电极移入超声清洗仪中依次用二次蒸馏水、无水乙醇、二次蒸馏水超声清洗5 min/次，室温晾干，取5.0u L固载酶悬浊液滴涂到预处理好的玻碳电极表面，晾干后再滴涂5.0u L壳聚糖溶液（Chi5 g/L），制成Chi/DAC-AChE/GCE传感器，在4℃冰箱中保存。 1.1.2农药检测方法 检测有机磷农药时 传感器浸入0.2 mmol/LATCh的PBS（pH 6.5），中进行差分脉冲伏安扫描记录未受农药抑制的传感器的峰电流I0 ，然后将该传感器侵入含不同浓度农药的PBS中抑制12min，洗净后于0.2 mmol/L ATCh的PBS（pH 6.5）中进行差分脉冲伏安扫描，测得受农药抑制后的传感器的峰电流，计算不同浓度农药对该传感器中酶的抑制率。 1.1.3分析结果 首先通过电镜观察到，AChE已接到DAC表面，经过固定化后DAC的形貌和径粒未发生改变形成的固定化酶颗粒呈球形、微小、分散性好，能与底物很好的发生酶促反应。其次进行红外表征对于AChE1 541 cm-1为N-H伸缩振动特征吸收峰DAC无此峰固定以后DAC-AChE 1 727 cm-1和887 cm-1两特征吸收峰几乎消失同时在1 535 cm-1 处出现新的吸收峰此峰为N-H特征吸收峰，说明AChE已连到DAC上成功制备了固载酶。第三，做了交流阻抗和循环伏安图进行修饰电极表征。除此之外考察了电解质溶液的pH值和传感器在农药中的抑制时间对峰电流的影响。最后考察了电极的重复性稳定性及再生性良好。 本文将游离酶通过化学键联技术固定在载体上，制成固载酶然后修饰到电极表面制成电化学生物传感器。该法为间接法与目前直接法相比，不但能较好地保持酶的活性，而且能增强酶在电极表面的稳定性，可实现酶电极反复多次使用。新型固载酶电极的研究可为有机磷农残检测提供快速灵敏的方法。 1.2.1电极制备 首先，5mL 0.5 mg/mL碳纳米管的胺化，现将表面有胺化的碳纳米管的电极表面抛光，在室温下风干，涂上5mL0.02 mg/mL的乙酰胆碱酯酶。在使用前，将电极浸入0.1M的PBS中约10分钟，以便