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Di Fan Nov. 12th, 2015 ZFN 蛋白的DNA识别域+核酸内切酶 DNA识别域： 由一系列 Cys2-His2锌指蛋白（zinc-fingers）串联组成（一般3~4个），每个锌指蛋白识别并结合一个特异的三联体碱基。 典型的 TALEN由一个包含核定位信号（NLS）的N端结构域、一个包含可识别特定 DNA序列的典型串联TALE重复序列的中央结构域，以及一个具有FokI核酸内切酶功能的C端结构域组成。 DNA识别域：由一系列TAL蛋白串联组成（一般20个左右），每个TAL蛋白识 别并结合一个对应的碱基。 核酸内切酶： 非特异性核酸内切酶FokI，形成二聚体时切割双链DNA TALEN质粒对共转入细胞后，表达两个融合蛋白，分别与靶位点特异结合，由于两个TALEN融合蛋白中的Fok I临近，形成二聚体，发挥非特异性内切酶活性，在两个靶位点之间剪切DNA。 形成DSB时，同源重组可将需要敲入的序列组合入基因组。 目前不清楚向导RNA分子的特异性作用机 脱靶效应（off-target effect）。Joung的工作显示，与向导RNA序列类似的非靶点DNA片段也能够被切断、激活或 者失活，即存在明显的脱靶效应。 新方法解决CRISPR-Cas系统难点 可减弱甚至消除消除脱靶效应 利用计算机模型。 调整导向RNA序列的量 计算高目标效应和低脱靶效应间最优平衡点 最新研